nature.com ని సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ వెర్షన్ పరిమిత CSS మద్దతును కలిగి ఉంది. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, తాజా బ్రౌజర్ వెర్షన్‌ను ఉపయోగించమని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో అనుకూలత మోడ్‌ను ఆఫ్ చేయడం). అదనంగా, నిరంతర మద్దతును నిర్ధారించడానికి, ఈ సైట్ శైలులు లేదా జావాస్క్రిప్ట్‌ను కలిగి ఉండదు.
మెలమైన్ అనేది గుర్తించబడిన ఆహార కలుషితం, ఇది కొన్ని ఆహార వర్గాలలో అనుకోకుండా మరియు ఉద్దేశపూర్వకంగా ఉండవచ్చు. ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం శిశు ఫార్ములా మరియు పాల పొడిలో మెలమైన్ యొక్క గుర్తింపు మరియు పరిమాణాన్ని ధృవీకరించడం. ఇరాన్‌లోని వివిధ ప్రాంతాల నుండి శిశు ఫార్ములా మరియు పాల పొడితో సహా మొత్తం 40 వాణిజ్యపరంగా అందుబాటులో ఉన్న ఆహార నమూనాలను విశ్లేషించారు. అధిక-పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-అతినీలలోహిత (HPLC-UV) వ్యవస్థను ఉపయోగించి నమూనాలలో సుమారుగా మెలమైన్ కంటెంట్ నిర్ణయించబడింది. 0.1–1.2 μg mL−1 పరిధిలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి ఒక క్రమాంకనం వక్రత (R2 = 0.9925) నిర్మించబడింది. పరిమాణీకరణ మరియు గుర్తింపు యొక్క పరిమితులు వరుసగా 1 μg mL−1 మరియు 3 μg mL−1. శిశు ఫార్ములా మరియు పాల పొడిలో మెలమైన్‌ను పరీక్షించారు మరియు ఫలితాలు శిశు ఫార్ములా మరియు పాల పొడి నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు వరుసగా 0.001–0.095 mg kg−1 మరియు 0.001–0.004 mg kg−1 అని చూపించాయి. ఈ విలువలు EU చట్టం మరియు కోడెక్స్ అలిమెంటారియస్‌కు అనుగుణంగా ఉన్నాయి. తగ్గిన మెలమైన్ కంటెంట్ ఉన్న ఈ పాల ఉత్పత్తుల వినియోగం వినియోగదారుల ఆరోగ్యానికి గణనీయమైన ప్రమాదాన్ని కలిగించదని గమనించడం ముఖ్యం. ప్రమాద అంచనా ఫలితాలు కూడా దీనికి మద్దతు ఇస్తున్నాయి.
మెలమైన్ అనేది C3H6N6 అనే పరమాణు సూత్రంతో కూడిన ఒక సేంద్రీయ సమ్మేళనం, ఇది సైనమైడ్ నుండి తీసుకోబడింది. ఇది నీటిలో చాలా తక్కువ ద్రావణీయతను కలిగి ఉంటుంది మరియు దాదాపు 66% నత్రజని కలిగి ఉంటుంది. మెలమైన్ అనేది ప్లాస్టిక్‌లు, ఎరువులు మరియు ఆహార ప్రాసెసింగ్ పరికరాల ఉత్పత్తిలో (ఆహార ప్యాకేజింగ్ మరియు వంట సామాగ్రితో సహా) విస్తృత శ్రేణి చట్టబద్ధమైన ఉపయోగాలతో విస్తృతంగా ఉపయోగించే పారిశ్రామిక సమ్మేళనం. 1,2. వ్యాధుల చికిత్స కోసం మెలమైన్‌ను ఔషధ వాహకంగా కూడా ఉపయోగిస్తారు. మెలమైన్‌లో అధిక మొత్తంలో నత్రజని ఉండటం వల్ల సమ్మేళనం దుర్వినియోగం అవుతుంది మరియు ఆహార పదార్థాలకు ప్రోటీన్ అణువుల లక్షణాలను అందిస్తుంది3,4. అందువల్ల, పాల ఉత్పత్తులతో సహా ఆహార ఉత్పత్తులకు మెలమైన్ జోడించడం వల్ల నత్రజని కంటెంట్ పెరుగుతుంది. అందువల్ల, పాలలో ప్రోటీన్ కంటెంట్ వాస్తవానికి ఉన్నదానికంటే ఎక్కువగా ఉందని తప్పుగా నిర్ధారించబడింది.
ప్రతి గ్రాము మెలమైన్ కలిపితే, ఆహారంలోని ప్రోటీన్ కంటెంట్ 0.4% పెరుగుతుంది. అయితే, మెలమైన్ నీటిలో బాగా కరుగుతుంది మరియు మరింత తీవ్రమైన హాని కలిగిస్తుంది. పాలు వంటి ద్రవ ఉత్పత్తులకు 1.3 గ్రాముల మెలమైన్ జోడించడం వల్ల పాల ప్రోటీన్ కంటెంట్ 30% పెరుగుతుంది. 5,6. ప్రోటీన్ కంటెంట్‌ను పెంచడానికి జంతువులకు మరియు మానవ ఆహారాలకు కూడా మెలమైన్ జోడించబడినప్పటికీ7, కోడెక్స్ అలిమెంటారియస్ కమిషన్ (CAC) మరియు జాతీయ అధికారులు మెలమైన్‌ను ఆహార సంకలితంగా ఆమోదించలేదు మరియు మింగడం, పీల్చడం లేదా చర్మం ద్వారా గ్రహించడం ప్రమాదకరమని జాబితా చేశారు. 2012లో, ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO) ఇంటర్నేషనల్ ఏజెన్సీ ఫర్ రీసెర్చ్ ఆన్ క్యాన్సర్ మెలమైన్‌ను క్లాస్ 2B కార్సినోజెన్‌గా జాబితా చేసింది ఎందుకంటే ఇది మానవ ఆరోగ్యానికి హానికరం8. మెలమైన్‌కు దీర్ఘకాలికంగా గురికావడం వల్ల క్యాన్సర్ లేదా మూత్రపిండాల నష్టం జరగవచ్చు2. ఆహారంలోని మెలమైన్ సైనూరిక్ ఆమ్లంతో కలిసి నీటిలో కరగని పసుపు స్ఫటికాలను ఏర్పరుస్తుంది, ఇది మూత్రపిండాలు మరియు మూత్రాశయ కణజాలానికి హాని కలిగిస్తుంది, అలాగే మూత్ర నాళ క్యాన్సర్ మరియు బరువు తగ్గడానికి కారణమవుతుంది9,10. ఇది తీవ్రమైన ఆహార విషప్రక్రియకు మరియు అధిక సాంద్రతలలో, ముఖ్యంగా శిశువులు మరియు చిన్న పిల్లలలో మరణానికి కారణమవుతుంది.11 ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO) CAC మార్గదర్శకాల ఆధారంగా మానవులకు మెలమైన్ యొక్క తట్టుకోగల రోజువారీ తీసుకోవడం (TDI)ని రోజుకు 0.2 mg/kg శరీర బరువుగా నిర్ణయించింది.12 US ఫుడ్ అండ్ డ్రగ్ అడ్మినిస్ట్రేషన్ (US FDA) మెలమైన్ యొక్క గరిష్ట అవశేష స్థాయిని శిశు ఫార్ములాలో 1 mg/kg మరియు ఇతర ఆహారాలలో 2.5 mg/kgగా నిర్ణయించింది.2,7 సెప్టెంబర్ 2008లో, అనేక దేశీయ శిశు ఫార్ముల తయారీదారులు తమ ఉత్పత్తులలో ప్రోటీన్ కంటెంట్‌ను పెంచడానికి పాలపొడికి మెలమైన్‌ను జోడించారని, దీని ఫలితంగా పాలపొడి విషప్రక్రియ జరిగిందని మరియు దేశవ్యాప్తంగా మెలమైన్ విషప్రయోగ సంఘటనకు దారితీసిందని, ఇది 294,000 కంటే ఎక్కువ మంది పిల్లలను అనారోగ్యానికి గురిచేసింది మరియు 50,000 కంటే ఎక్కువ మందిని ఆసుపత్రిలో చేర్చిందని నివేదించబడింది. 13
పట్టణ జీవితంలోని ఇబ్బందులు, తల్లి లేదా బిడ్డ అనారోగ్యం వంటి వివిధ కారణాల వల్ల తల్లిపాలు ఇవ్వడం ఎల్లప్పుడూ సాధ్యం కాదు, ఇది శిశువులకు ఆహారం ఇవ్వడానికి శిశు ఫార్ములాను ఉపయోగించటానికి దారితీస్తుంది. ఫలితంగా, కూర్పులో తల్లి పాలకు సాధ్యమైనంత దగ్గరగా ఉండే శిశు ఫార్ములాను ఉత్పత్తి చేయడానికి కర్మాగారాలు స్థాపించబడ్డాయి14. మార్కెట్లో విక్రయించే శిశు ఫార్ములాను సాధారణంగా ఆవు పాలతో తయారు చేస్తారు మరియు సాధారణంగా కొవ్వులు, ప్రోటీన్లు, కార్బోహైడ్రేట్లు, విటమిన్లు, ఖనిజాలు మరియు ఇతర సమ్మేళనాల ప్రత్యేక మిశ్రమంతో తయారు చేస్తారు. తల్లి పాలకు దగ్గరగా ఉండటానికి, ఫార్ములాలోని ప్రోటీన్ మరియు కొవ్వు శాతం మారుతూ ఉంటుంది మరియు పాల రకాన్ని బట్టి, అవి విటమిన్లు మరియు ఇనుము వంటి ఖనిజాలు వంటి సమ్మేళనాలతో బలపరచబడతాయి15. శిశువులు సున్నితమైన సమూహం మరియు విషప్రయోగం ప్రమాదం ఉన్నందున, పాలపొడి వినియోగం యొక్క భద్రత ఆరోగ్యానికి చాలా ముఖ్యమైనది. చైనీస్ శిశువులలో మెలమైన్ విషప్రయోగం కేసు తర్వాత, ప్రపంచవ్యాప్తంగా ఉన్న దేశాలు ఈ సమస్యపై చాలా శ్రద్ధ చూపాయి మరియు ఈ ప్రాంతం యొక్క సున్నితత్వం కూడా పెరిగింది. అందువల్ల, శిశువుల ఆరోగ్యాన్ని కాపాడటానికి శిశు ఫార్ముల ఉత్పత్తి నియంత్రణను బలోపేతం చేయడం చాలా ముఖ్యం. ఆహారంలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి వివిధ పద్ధతులు ఉన్నాయి, వాటిలో హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC), ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్, సెన్సరీ పద్ధతి, స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రీ మరియు యాంటిజెన్-యాంటీబాడీ ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసోర్బెంట్ అస్సే 16 ఉన్నాయి. 2007లో, US ఫుడ్ అండ్ డ్రగ్ అడ్మినిస్ట్రేషన్ (FDA) ఆహారంలో మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లాన్ని నిర్ణయించడానికి HPLC పద్ధతిని అభివృద్ధి చేసి ప్రచురించింది, ఇది మెలమైన్ కంటెంట్‌ను నిర్ణయించడానికి అత్యంత ప్రభావవంతమైన పద్ధతి 17.
కొత్త ఇన్‌ఫ్రారెడ్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ టెక్నిక్ ఉపయోగించి కొలిచిన శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ సాంద్రతలు కిలోగ్రాముకు 0.33 నుండి 0.96 మిల్లీగ్రాముల వరకు ఉన్నాయి (mg kg-1). 18 శ్రీలంకలో జరిపిన ఒక అధ్యయనంలో మొత్తం పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.39 నుండి 0.84 mg kg-1 వరకు ఉన్నాయని తేలింది. అదనంగా, దిగుమతి చేసుకున్న శిశు ఫార్ములా నమూనాలలో వరుసగా 0.96 మరియు 0.94 mg/kg వద్ద అత్యధిక స్థాయిలలో మెలమైన్ ఉంది. ఈ స్థాయిలు నియంత్రణ పరిమితి (1 mg/kg) కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి, కానీ వినియోగదారుల భద్రత కోసం పర్యవేక్షణ కార్యక్రమం అవసరం. 19
ఇరానియన్ శిశు ఫార్ములాల్లో మెలమైన్ స్థాయిలను అనేక అధ్యయనాలు పరిశీలించాయి. దాదాపు 65% నమూనాలలో మెలమైన్ ఉంది, సగటున 0.73 mg/kg మరియు గరిష్టంగా 3.63 mg/kg. మరొక అధ్యయనం ప్రకారం శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ స్థాయి 0.35 నుండి 3.40 μg/kg వరకు ఉంది, సగటున 1.38 μg/kg. మొత్తంమీద, ఇరానియన్ శిశు ఫార్ములాల్లో మెలమైన్ ఉనికి మరియు స్థాయిని వివిధ అధ్యయనాలలో అంచనా వేశారు, కొన్ని నమూనాలలో నియంత్రణ అధికారులు నిర్దేశించిన గరిష్ట పరిమితిని మించి మెలమైన్ ఉంది (2.5 mg/kg/feed).
ఆహార పరిశ్రమలో పాలపొడి యొక్క ప్రత్యక్ష మరియు పరోక్ష వినియోగం మరియు పిల్లలకు ఆహారం ఇవ్వడంలో శిశు ఫార్ములా యొక్క ప్రత్యేక ప్రాముఖ్యతను పరిగణనలోకి తీసుకుని, ఈ అధ్యయనం పాలపొడి మరియు శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ యొక్క గుర్తింపు పద్ధతిని ధృవీకరించడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది. వాస్తవానికి, ఈ అధ్యయనం యొక్క మొదటి లక్ష్యం హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) మరియు అతినీలలోహిత (UV) గుర్తింపును ఉపయోగించి శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ కల్తీని గుర్తించడానికి వేగవంతమైన, సరళమైన మరియు ఖచ్చితమైన పరిమాణాత్మక పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం; రెండవది, ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం ఇరానియన్ మార్కెట్‌లో విక్రయించే శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ కంటెంట్‌ను నిర్ణయించడం.
మెలమైన్ విశ్లేషణకు ఉపయోగించే పరికరాలు ఆహార ఉత్పత్తి స్థానాన్ని బట్టి మారుతూ ఉంటాయి. పాలు మరియు శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ అవశేషాలను కొలవడానికి సున్నితమైన మరియు నమ్మదగిన HPLC-UV విశ్లేషణ పద్ధతిని ఉపయోగించారు. పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ కొలతకు ఆటంకం కలిగించే వివిధ ప్రోటీన్లు మరియు కొవ్వులు ఉంటాయి. అందువల్ల, సన్ మరియు ఇతరులు గుర్తించినట్లుగా. 22, వాయిద్య విశ్లేషణకు ముందు తగిన మరియు ప్రభావవంతమైన శుభ్రపరిచే వ్యూహం అవసరం. ఈ అధ్యయనంలో, మేము డిస్పోజబుల్ సిరంజి ఫిల్టర్‌లను ఉపయోగించాము. ఈ అధ్యయనంలో, శిశు ఫార్ములా మరియు పాల పొడిలో మెలమైన్‌ను వేరు చేయడానికి మేము C18 కాలమ్‌ను ఉపయోగించాము. మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం క్రోమాటోగ్రామ్‌ను చిత్రం 1 చూపిస్తుంది. అదనంగా, 0.1–1.2 mg/kg మెలమైన్ కలిగిన నమూనాల రికవరీ 95% నుండి 109% వరకు ఉంది, రిగ్రెషన్ సమీకరణం y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925), మరియు సాపేక్ష ప్రామాణిక విచలనం (RSD) విలువలు 0.8 నుండి 2% వరకు ఉన్నాయి. అందుబాటులో ఉన్న డేటా ప్రకారం, అధ్యయనం చేయబడిన ఏకాగ్రత పరిధిలో ఈ పద్ధతి నమ్మదగినది (టేబుల్ 1). మెలమైన్ యొక్క ఇన్స్ట్రుమెంటల్ డిటెక్షన్ లిమిట్ (LOD) మరియు క్వాంటిఫికేషన్ లిమిట్ (LOQ) వరుసగా 1 μg mL−1 మరియు 3 μg mL−1. అదనంగా, మెలమైన్ యొక్క UV స్పెక్ట్రం 242 nm వద్ద శోషణ బ్యాండ్‌ను ప్రదర్శించింది. డిటెక్షన్ పద్ధతి సున్నితమైనది, నమ్మదగినది మరియు ఖచ్చితమైనది. మెలమైన్ స్థాయిని రొటీన్ గా నిర్ణయించడానికి ఈ పద్ధతిని ఉపయోగించవచ్చు.
ఇలాంటి ఫలితాలను అనేక మంది రచయితలు ప్రచురించారు. పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ విశ్లేషణ కోసం అధిక-పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-ఫోటోడియోడ్ అర్రే (HPLC) పద్ధతిని అభివృద్ధి చేశారు. 240 nm వద్ద పాల పొడికి 340 μg kg−1 మరియు శిశు ఫార్ములాకు 280 μg kg−1 పరిమాణీకరణ యొక్క తక్కువ పరిమితులు. HPLC ద్వారా శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ కనుగొనబడలేదని ఫిలాజ్జి మరియు ఇతరులు (2012) నివేదించారు. అయితే, 8% పాల పొడి నమూనాలలో 0.505–0.86 mg/kg స్థాయిలో మెలమైన్ ఉంది. టిటిల్‌మిట్ మరియు ఇతరులు 23 ఇలాంటి అధ్యయనాన్ని నిర్వహించి, అధిక-పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ/MS (HPLC-MS/MS) ద్వారా శిశు ఫార్ములా (నమూనా సంఖ్య: 72) యొక్క మెలమైన్ కంటెంట్‌ను సుమారు 0.0431–0.346 mg kg−1 గా నిర్ణయించారు. వెంకటసామి మరియు ఇతరులు నిర్వహించిన అధ్యయనంలో. (2010), శిశు ఫార్ములా మరియు పాలలో మెలమైన్‌ను అంచనా వేయడానికి గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ విధానం (అసిటోనిట్రైల్ లేకుండా) మరియు రివర్స్డ్-ఫేజ్ హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-HPLC) ఉపయోగించబడ్డాయి. నమూనా గాఢత పరిధి 1.0 నుండి 80 g/mL వరకు ఉంది మరియు ప్రతిస్పందన సరళంగా ఉంది (r > 0.999). ఈ పద్ధతి 5–40 g/mL గాఢత పరిధి కంటే 97.2–101.2 రికవరీలను చూపించింది మరియు పునరుత్పత్తి సామర్థ్యం 1.0% సాపేక్ష ప్రామాణిక విచలనం కంటే తక్కువగా ఉంది. ఇంకా, గమనించిన LOD మరియు LOQ వరుసగా 0.1 g mL−1 మరియు 0.2 g mL−124. లూటర్ మరియు ఇతరులు (2011) HPLC-UV ఉపయోగించి ఆవు పాలు మరియు పాల ఆధారిత శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ కాలుష్యాన్ని నిర్ణయించారు. మెలమైన్ సాంద్రతలు < 0.2 నుండి 2.52 mg kg−1 వరకు ఉన్నాయి. HPLC-UV పద్ధతి యొక్క లీనియర్ డైనమిక్ పరిధి ఆవు పాలకు 0.05 నుండి 2.5 mg kg−1, ప్రోటీన్ ద్రవ్యరాశి భిన్నం <15% ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.13 నుండి 6.25 mg kg−1, మరియు ప్రోటీన్ ద్రవ్యరాశి భిన్నం 15% ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.25 నుండి 12.5 mg kg−1. LOD (మరియు LOQ) ఫలితాలు ఆవు పాలకు 0.03 mg kg−1 (0.09 mg kg−1), శిశు ఫార్ములాకు <15% ప్రోటీన్ ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.06 mg kg−1 (0.18 mg kg−1) మరియు శిశు ఫార్ములా 15% ప్రోటీన్ ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.12 mg kg−1 (0.36 mg kg−1), LOD మరియు LOQకి వరుసగా 3 మరియు 1025 సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తితో ఉన్నాయి. డైబ్స్ మరియు ఇతరులు (2012) HPLC/DMDని ఉపయోగించి శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడి నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలను పరిశోధించారు. శిశు ఫార్ములాలో, అత్యల్ప మరియు అత్యధిక స్థాయిలు వరుసగా 9.49 mg kg−1 మరియు 258 mg kg−1. గుర్తింపు పరిమితి (LOD) 0.05 mg kg−1.
జావైద్ మరియు ఇతరులు, ఫోరియర్ ట్రాన్స్‌ఫార్మ్ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3.5 mg kg−1) ద్వారా శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ అవశేషాలు 0.002–2 mg kg−1 పరిధిలో ఉన్నాయని నివేదించారు. రెజాయ్ మరియు ఇతరులు.27 మెలమైన్‌ను అంచనా వేయడానికి HPLC-DDA (λ = 220 nm) పద్ధతిని ప్రతిపాదించారు మరియు పాలపొడి కోసం 0.08 μg mL−1 LOQని సాధించారు, ఇది ఈ అధ్యయనంలో పొందిన స్థాయి కంటే తక్కువగా ఉంది. సాలిడ్ ఫేజ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ (SPE) ద్వారా ద్రవ పాలలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి సన్ మరియు ఇతరులు RP-HPLC-DADని అభివృద్ధి చేశారు. వారు వరుసగా 18 మరియు 60 μg kg−128 LOD మరియు LOQని పొందారు, ఇది ప్రస్తుత అధ్యయనం కంటే చాలా సున్నితమైనది. మోంటెసానో మరియు ఇతరులు. 0.05–3 mg/kg పరిమాణ పరిమితితో ప్రోటీన్ సప్లిమెంట్లలో మెలమైన్ కంటెంట్‌ను అంచనా వేయడానికి HPLC-DMD పద్ధతి యొక్క ప్రభావాన్ని నిర్ధారించారు, ఇది ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించిన పద్ధతి కంటే తక్కువ సున్నితమైనది29.
నిస్సందేహంగా, వివిధ నమూనాలలో కాలుష్య కారకాలను పర్యవేక్షించడం ద్వారా పర్యావరణాన్ని రక్షించడంలో విశ్లేషణాత్మక ప్రయోగశాలలు ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తాయి. అయితే, విశ్లేషణ సమయంలో పెద్ద సంఖ్యలో కారకాలు మరియు ద్రావకాలను ఉపయోగించడం వల్ల ప్రమాదకర అవశేషాలు ఏర్పడవచ్చు. అందువల్ల, ఆపరేటర్లు మరియు పర్యావరణంపై విశ్లేషణాత్మక విధానాల యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తగ్గించడానికి లేదా తొలగించడానికి గ్రీన్ అనలిటికల్ కెమిస్ట్రీ (GAC) 2000లో అభివృద్ధి చేయబడింది26. క్రోమాటోగ్రఫీ, ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్, క్యాపిల్లరీ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ మరియు ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసోర్బెంట్ అస్సే (ELISA)తో సహా సాంప్రదాయ మెలమైన్ గుర్తింపు పద్ధతులు మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి ఉపయోగించబడ్డాయి. అయితే, అనేక గుర్తింపు పద్ధతులలో, ఎలక్ట్రోకెమికల్ సెన్సార్లు వాటి అద్భుతమైన సున్నితత్వం, ఎంపిక, వేగవంతమైన విశ్లేషణ సమయం మరియు వినియోగదారు-స్నేహపూర్వక లక్షణాల కారణంగా చాలా దృష్టిని ఆకర్షించాయి30,31. గ్రీన్ నానోటెక్నాలజీ నానోమెటీరియల్‌లను సంశ్లేషణ చేయడానికి జీవ మార్గాలను ఉపయోగిస్తుంది, ఇది ప్రమాదకర వ్యర్థాల ఉత్పత్తిని మరియు శక్తి వినియోగాన్ని తగ్గిస్తుంది, తద్వారా స్థిరమైన పద్ధతుల అమలును ప్రోత్సహిస్తుంది. ఉదాహరణకు, పర్యావరణ అనుకూల పదార్థాల నుండి తయారు చేయబడిన నానోకంపోజిట్‌లను, మెలమైన్ వంటి పదార్థాలను గుర్తించడానికి బయోసెన్సర్‌లలో ఉపయోగించవచ్చు32,33,34.
సాంప్రదాయ వెలికితీత పద్ధతులతో పోలిస్తే దాని అధిక శక్తి సామర్థ్యం మరియు స్థిరత్వం కారణంగా ఘన-దశ సూక్ష్మ వెలికితీత (SPME) సమర్థవంతంగా ఉపయోగించబడుతుందని అధ్యయనం చూపిస్తుంది. SPME యొక్క పర్యావరణ అనుకూలత మరియు శక్తి సామర్థ్యం విశ్లేషణాత్మక రసాయన శాస్త్రంలో సాంప్రదాయ వెలికితీత పద్ధతులకు దీనిని అద్భుతమైన ప్రత్యామ్నాయంగా చేస్తాయి మరియు నమూనా తయారీకి మరింత స్థిరమైన మరియు సమర్థవంతమైన పద్ధతిని అందిస్తాయి35.
2013లో, వు మరియు ఇతరులు అత్యంత సున్నితమైన మరియు ఎంపిక చేసిన ఉపరితల ప్లాస్మోన్ రెసొనెన్స్ (మినీ-SPR) బయోసెన్సర్‌ను అభివృద్ధి చేశారు, ఇది మెలమైన్ మరియు యాంటీ-మెలమైన్ యాంటీబాడీల మధ్య కలయికను ఉపయోగించి శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను వేగంగా గుర్తించడానికి ఇమ్యునోఅస్సేను ఉపయోగించుకుంటుంది. SPR బయోసెన్సర్ ఇమ్యునోఅస్సేతో కలిపి (మెలమైన్-కంజుగేటెడ్ బోవిన్ సీరం అల్బుమిన్‌ను ఉపయోగించడం) 0.02 μg mL-136 గుర్తింపు పరిమితితో ఉపయోగించడానికి సులభమైన మరియు తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన సాంకేతికత.
వాణిజ్య నమూనాలలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి నాసిరి మరియు అబ్బాసియన్ గ్రాఫేన్ ఆక్సైడ్-చిటోసాన్ కాంపోజిట్స్ (GOCS)తో కలిపి హై-పొటెన్షియల్ పోర్టబుల్ సెన్సార్‌ను ఉపయోగించారు37. ఈ పద్ధతి అల్ట్రా-హై సెలెక్టివిటీ, ఖచ్చితత్వం మరియు ప్రతిస్పందనను చూపించింది. GOCS సెన్సార్ అద్భుతమైన సున్నితత్వాన్ని (239.1 μM−1), 0.01 నుండి 200 μM వరకు లీనియర్ పరిధి, 1.73 × 104 యొక్క అఫినిటీ స్థిరాంకం మరియు 10 nM వరకు LODని ప్రదర్శించింది. అంతేకాకుండా, 2024లో చంద్రశేఖర్ మరియు ఇతరులు నిర్వహించిన అధ్యయనం పర్యావరణ అనుకూలమైన మరియు ఖర్చుతో కూడుకున్న విధానాన్ని అనుసరించింది. పర్యావరణ అనుకూల పద్ధతిలో జింక్ ఆక్సైడ్ నానోపార్టికల్స్ (ZnO-NPలు) సంశ్లేషణ చేయడానికి వారు బొప్పాయి తొక్క సారాన్ని తగ్గించే ఏజెంట్‌గా ఉపయోగించారు. తదనంతరం, శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి ఒక ప్రత్యేకమైన మైక్రో-రామన్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ టెక్నిక్ అభివృద్ధి చేయబడింది. వ్యవసాయ వ్యర్థాల నుండి తీసుకోబడిన ZnO-NPలు విలువైన రోగనిర్ధారణ సాధనంగా మరియు మెలమైన్‌ను పర్యవేక్షించడానికి మరియు గుర్తించడానికి నమ్మకమైన, తక్కువ-ధర సాంకేతికతగా సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శించాయి38.
అలిజాదే మరియు ఇతరులు (2024) పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి అత్యంత సున్నితమైన లోహ-సేంద్రీయ ఫ్రేమ్‌వర్క్ (MOF) ఫ్లోరోసెన్స్ ప్లాట్‌ఫామ్‌ను ఉపయోగించారు. 3σ/S ఉపయోగించి నిర్ణయించబడిన సెన్సార్ యొక్క లీనియర్ పరిధి మరియు తక్కువ గుర్తింపు పరిమితి వరుసగా 40 నుండి 396.45 nM (25 μg kg−1 నుండి 0.25 mg kg−1 కు సమానం) మరియు 40 nM (25 μg kg−1 కు సమానం). ఈ పరిధి శిశు ఫార్ములా (1 mg kg−1) మరియు ఇతర ఆహారం/ఫీడ్ నమూనాలలో (2.5 mg kg−1) మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం సెట్ చేయబడిన గరిష్ట అవశేష స్థాయిలు (MRLలు) కంటే చాలా తక్కువగా ఉంది. ఫ్లోరోసెంట్ సెన్సార్ (టెర్బియం (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడంలో HPLC39 కంటే ఎక్కువ ఖచ్చితత్వం మరియు మరింత ఖచ్చితమైన కొలత సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శించింది. గ్రీన్ కెమిస్ట్రీలోని బయోసెన్సర్లు మరియు నానోకంపోజిట్‌లు గుర్తింపు సామర్థ్యాలను పెంచడమే కాకుండా స్థిరమైన అభివృద్ధి సూత్రాలకు అనుగుణంగా పర్యావరణ ప్రమాదాలను కూడా తగ్గిస్తాయి.
మెలమైన్ నిర్ధారణకు వివిధ పద్ధతులకు గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ సూత్రాలను వర్తింపజేసారు. శిశు ఫార్ములా మరియు వేడి నీటి వంటి నమూనాల నుండి మెలమైన్ 40 యొక్క సమర్థవంతమైన వెలికితీత కోసం సిట్రిక్ యాసిడ్‌తో సహజ ధ్రువ పాలిమర్ β-సైక్లోడెక్స్ట్రిన్ క్రాస్-లింక్డ్ ఉపయోగించి గ్రీన్ డిస్పర్సివ్ సాలిడ్-ఫేజ్ మైక్రోఎక్స్‌ట్రాక్షన్ పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం ఒక విధానం. పాల నమూనాలలో మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి మరొక పద్ధతి మానిచ్ ప్రతిచర్యను ఉపయోగిస్తుంది. ఈ పద్ధతి చవకైనది, పర్యావరణ అనుకూలమైనది మరియు 0.1–2.5 ppm యొక్క సరళ పరిధి మరియు తక్కువ గుర్తింపు పరిమితి 41తో అత్యంత ఖచ్చితమైనది. ఇంకా, ద్రవ పాలు మరియు శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ యొక్క పరిమాణాత్మక నిర్ణయం కోసం ఖర్చు-సమర్థవంతమైన మరియు పర్యావరణ అనుకూల పద్ధతిని ఫోరియర్ ట్రాన్స్‌ఫార్మ్ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ ట్రాన్స్‌మిషన్ స్పెక్ట్రోస్కోపీని ఉపయోగించి వరుసగా 1 ppm మరియు 3.5 ppm యొక్క అధిక ఖచ్చితత్వం మరియు గుర్తింపు పరిమితులతో అభివృద్ధి చేశారు 42. ఈ పద్ధతులు మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి సమర్థవంతమైన మరియు స్థిరమైన పద్ధతుల అభివృద్ధికి గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ సూత్రాల అనువర్తనాన్ని ప్రదర్శిస్తాయి.
మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం అనేక అధ్యయనాలు వినూత్న పద్ధతులను ప్రతిపాదించాయి, అవి సాలిడ్-ఫేజ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ మరియు హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC)43 వాడకం, అలాగే ఫాస్ట్ హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC), దీనికి సంక్లిష్టమైన ముందస్తు చికిత్స లేదా అయాన్-జత కారకాలు అవసరం లేదు, తద్వారా రసాయన వ్యర్థాల పరిమాణాన్ని తగ్గిస్తుంది44. ఈ పద్ధతులు పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి ఖచ్చితమైన ఫలితాలను అందించడమే కాకుండా, గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ సూత్రాలకు అనుగుణంగా ఉంటాయి, ప్రమాదకర రసాయనాల వాడకాన్ని తగ్గిస్తాయి మరియు విశ్లేషణాత్మక ప్రక్రియ యొక్క మొత్తం పర్యావరణ ప్రభావాన్ని తగ్గిస్తాయి.
వివిధ బ్రాండ్ల నలభై నమూనాలను మూడుసార్లు పరీక్షించారు మరియు ఫలితాలు పట్టిక 2లో ప్రదర్శించబడ్డాయి. శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడి నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు వరుసగా 0.001 నుండి 0.004 mg/kg వరకు మరియు 0.001 నుండి 0.095 mg/kg వరకు ఉన్నాయి. శిశు ఫార్ములా యొక్క మూడు వయసుల మధ్య గణనీయమైన మార్పులు గమనించబడలేదు. అదనంగా, 80% పాలపొడిలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది, కానీ 65% శిశు ఫార్ములా మెలమైన్‌తో కలుషితమైంది.
పారిశ్రామిక పాలపొడిలో మెలమైన్ కంటెంట్ శిశు ఫార్ములాలో కంటే ఎక్కువగా ఉంది మరియు వ్యత్యాసం గణనీయంగా ఉంది (p<0.05) (మూర్తి 2).
పొందిన ఫలితాలు FDA నిర్దేశించిన పరిమితుల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి (1 మరియు 2.5 mg/kg కంటే తక్కువ). అదనంగా, ఫలితాలు CAC (2010) మరియు EU45,46 ద్వారా నిర్ణయించబడిన పరిమితులకు అనుగుణంగా ఉన్నాయి, అనగా గరిష్టంగా అనుమతించబడిన పరిమితి శిశు ఫార్ములాకు 1 mg kg-1 మరియు పాల ఉత్పత్తులకు 2.5 mg kg-1.
ఘనాటి మరియు ఇతరులు 2023లో నిర్వహించిన అధ్యయనం ప్రకారం, ఇరాన్‌లోని వివిధ రకాల ప్యాకేజ్డ్ పాలలో మెలమైన్ కంటెంట్ 50.7 నుండి 790 μg kg−1 వరకు ఉంది. వాటి ఫలితాలు FDA అనుమతించదగిన పరిమితి కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి. మా ఫలితాలు షోడర్ మరియు ఇతరులు 48 మరియు రిమా మరియు ఇతరులు 49 కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి. షోడర్ మరియు ఇతరులు (2010) ELISA ద్వారా నిర్ణయించబడిన పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలు (n=49) 0.5 నుండి 5.5 mg/kg వరకు ఉన్నాయని కనుగొన్నారు. ఫ్లోరోసెన్స్ స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రీ ద్వారా పాలపొడిలోని మెలమైన్ అవశేషాలను రిమా మరియు ఇతరులు విశ్లేషించారు మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ కంటెంట్ 0.72–5.76 mg/kg అని కనుగొన్నారు. లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC/MS) ఉపయోగించి శిశు సూత్రంలో (n=94) మెలమైన్ స్థాయిలను పర్యవేక్షించడానికి 2011లో కెనడాలో ఒక అధ్యయనం నిర్వహించబడింది. మెలమైన్ సాంద్రతలు ఆమోదయోగ్యమైన పరిమితి కంటే తక్కువగా ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది (ప్రాథమిక ప్రమాణం: 0.5 mg kg−1). గుర్తించబడిన మోసపూరిత మెలమైన్ స్థాయిలు ప్రోటీన్ కంటెంట్‌ను పెంచడానికి ఉపయోగించిన వ్యూహం అని చెప్పలేము. అయితే, ఎరువుల వాడకం, కంటైనర్ కంటెంట్‌లను తరలించడం లేదా ఇలాంటి కారకాల ద్వారా దీనిని వివరించలేము. ఇంకా, కెనడాకు దిగుమతి చేసుకున్న పాలపొడిలో మెలమైన్ యొక్క మూలం వెల్లడి కాలేదు50.
హస్సాని తదితరులు 2013లో ఇరానియన్ మార్కెట్‌లో పాలపొడి మరియు ద్రవ పాలలో మెలమైన్ కంటెంట్‌ను కొలిచారు మరియు ఇలాంటి ఫలితాలను కనుగొన్నారు. ఒక బ్రాండ్ పాలపొడి మరియు ద్రవ పాలు మినహా, మిగిలిన అన్ని నమూనాలలో మెలమైన్ కలుషితమైందని ఫలితాలు చూపించాయి, పాలపొడిలో 1.50 నుండి 30.32 μg g−1 మరియు పాలలో 0.11 నుండి 1.48 μg ml−1 వరకు స్థాయిలు ఉన్నాయి. ముఖ్యంగా, సైనూరిక్ ఆమ్లం ఏ నమూనాలలోనూ కనుగొనబడలేదు, ఇది వినియోగదారులకు మెలమైన్ విషప్రయోగం సంభావ్యతను తగ్గిస్తుంది. 51 మునుపటి అధ్యయనాలు పాలపొడి కలిగిన చాక్లెట్ ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ సాంద్రతను అంచనా వేసాయి. దిగుమతి చేసుకున్న నమూనాలలో దాదాపు 94% మరియు ఇరానియన్ నమూనాలలో 77% మెలమైన్‌ను కలిగి ఉన్నాయి. దిగుమతి చేసుకున్న నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.032 నుండి 2.692 mg/kg వరకు ఉన్నాయి, అయితే ఇరానియన్ నమూనాలలో 0.013 నుండి 2.600 mg/kg వరకు ఉన్నాయి. మొత్తంమీద, 85% నమూనాలలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది, కానీ ఒక నిర్దిష్ట బ్రాండ్ మాత్రమే అనుమతించదగిన పరిమితి కంటే ఎక్కువ స్థాయిలను కలిగి ఉంది.44 టిటిల్మియర్ మరియు ఇతరులు పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.00528 నుండి 0.0122 mg/kg వరకు ఉన్నాయని నివేదించారు.
మూడు వయసుల వారికి సంబంధించిన ప్రమాద అంచనా ఫలితాలను పట్టిక 3 సంగ్రహంగా చూపిస్తుంది. అన్ని వయసుల వారికి ప్రమాదం 1 కంటే తక్కువగా ఉంది. అందువల్ల, శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ నుండి క్యాన్సర్ కాని ఆరోగ్య ప్రమాదం లేదు.
పాల ఉత్పత్తులలో తక్కువ స్థాయి కాలుష్యం తయారీ సమయంలో అనుకోకుండా కలుషితం కావడం వల్ల కావచ్చు, అయితే ఎక్కువ స్థాయిలు ఉద్దేశపూర్వకంగా జోడించడం వల్ల కావచ్చు. ఇంకా, తక్కువ మెలమైన్ స్థాయిలు కలిగిన పాల ఉత్పత్తులను తీసుకోవడం వల్ల మానవ ఆరోగ్యానికి మొత్తం ప్రమాదం తక్కువగా పరిగణించబడుతుంది. ఇంత తక్కువ స్థాయిలో మెలమైన్ ఉన్న ఉత్పత్తులను తీసుకోవడం వల్ల వినియోగదారుల ఆరోగ్యానికి ఎటువంటి ప్రమాదం ఉండదని తేల్చవచ్చు52.
పాడి పరిశ్రమలో ఆహార భద్రత నిర్వహణ యొక్క ప్రాముఖ్యతను పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, ముఖ్యంగా ప్రజారోగ్యాన్ని కాపాడటంలో, పాలపొడి మరియు శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్ స్థాయిలు మరియు అవశేషాలను అంచనా వేయడానికి మరియు పోల్చడానికి ఒక పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం మరియు ధృవీకరించడం చాలా ముఖ్యం. శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను నిర్ణయించడానికి ఒక సరళమైన మరియు ఖచ్చితమైన HPLC-UV స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్ పద్ధతిని అభివృద్ధి చేశారు. దాని విశ్వసనీయత మరియు ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి ఈ పద్ధతి ధృవీకరించబడింది. ఈ పద్ధతి యొక్క గుర్తింపు మరియు పరిమాణ పరిమితులు శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలను కొలవడానికి తగినంత సున్నితంగా ఉన్నాయని చూపబడింది. మా డేటా ప్రకారం, చాలా ఇరానియన్ నమూనాలలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది. కనుగొనబడిన అన్ని మెలమైన్ స్థాయిలు CAC నిర్దేశించిన గరిష్ట అనుమతించదగిన పరిమితుల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి, ఈ రకమైన పాల ఉత్పత్తుల వినియోగం మానవ ఆరోగ్యానికి హాని కలిగించదని సూచిస్తుంది.
ఉపయోగించిన అన్ని రసాయన కారకాలు విశ్లేషణాత్మక గ్రేడ్‌కు చెందినవి: మెలమైన్ (2,4,6-ట్రయామినో-1,3,5-ట్రయాజిన్) 99% స్వచ్ఛమైనవి (సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, సెయింట్ లూయిస్, MO); HPLC-గ్రేడ్ అసిటోనిట్రైల్ (మెర్క్, డార్మ్‌స్టాడ్ట్, జర్మనీ); అల్ట్రాప్యూర్ నీరు (మిల్లిపోర్, మోర్ఫ్‌హీమ్, ఫ్రాన్స్). డిస్పోజబుల్ సిరంజి ఫిల్టర్లు (క్రోమాఫిల్ ఎక్స్‌ట్రా PVDF-45/25, పోర్ సైజు 0.45 μm, మెంబ్రేన్ వ్యాసం 25 మిమీ) (మాచెరీ-నాగెల్, డ్యూరెన్, జర్మనీ).
నమూనాలను తయారు చేయడానికి అల్ట్రాసోనిక్ బాత్ (ఎల్మా, జర్మనీ), సెంట్రిఫ్యూజ్ (బెక్మాన్ కౌల్టర్, క్రెఫెల్డ్, జర్మనీ) మరియు HPLC (KNAUER, జర్మనీ) ఉపయోగించబడ్డాయి.
UV డిటెక్టర్‌తో కూడిన అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫ్ (KNAUER, జర్మనీ) ఉపయోగించబడింది. HPLC విశ్లేషణ పరిస్థితులు ఈ క్రింది విధంగా ఉన్నాయి: ODS-3 C18 విశ్లేషణాత్మక కాలమ్ (4.6 mm × 250 mm, కణ పరిమాణం 5 μm) (MZ, జర్మనీ)తో కూడిన UHPLC అల్టిమేట్ సిస్టమ్ ఉపయోగించబడింది. HPLC ఎల్యూయెంట్ (మొబైల్ దశ) అనేది 1 mL min-1 ప్రవాహ రేటుతో TFA/మిథనాల్ మిశ్రమం (450:50 mL). గుర్తింపు తరంగదైర్ఘ్యం 242 nm. ఇంజెక్షన్ వాల్యూమ్ 100 μL, కాలమ్ ఉష్ణోగ్రత 20 °C. ఔషధం యొక్క నిలుపుదల సమయం ఎక్కువ (15 నిమిషాలు) కాబట్టి, తదుపరి ఇంజెక్షన్ 25 నిమిషాల తర్వాత చేయాలి. నిలుపుదల సమయం మరియు మెలమైన్ ప్రమాణాల UV స్పెక్ట్రమ్ శిఖరాన్ని పోల్చడం ద్వారా మెలమైన్‌ను గుర్తించారు.
నీటిని ఉపయోగించి మెలమైన్ (10 μg/mL) యొక్క ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని తయారు చేసి, కాంతికి దూరంగా ఉన్న రిఫ్రిజిరేటర్‌లో (4 °C) నిల్వ చేశారు. స్టాక్ ద్రావణాన్ని మొబైల్ దశతో కరిగించి, పని చేసే ప్రామాణిక పరిష్కారాలను సిద్ధం చేయండి. ప్రతి ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని HPLCలోకి 7 సార్లు ఇంజెక్ట్ చేశారు. నిర్ణయించిన శిఖర ప్రాంతం మరియు నిర్ణయించిన ఏకాగ్రత యొక్క తిరోగమన విశ్లేషణ ద్వారా అమరిక సమీకరణం 10 లెక్కించబడింది.
వాణిజ్యపరంగా లభించే ఆవు పాల పొడి (20 నమూనాలు) మరియు వివిధ బ్రాండ్ల ఆవు పాల ఆధారిత శిశు ఫార్ముల నమూనాలను (20 నమూనాలు) ఇరాన్‌లోని స్థానిక సూపర్ మార్కెట్‌లు మరియు ఫార్మసీల నుండి వివిధ వయసుల (0–6 నెలలు, 6–12 నెలలు మరియు >12 నెలలు) శిశువులకు ఆహారం ఇవ్వడానికి కొనుగోలు చేశారు మరియు విశ్లేషణ వరకు రిఫ్రిజిరేటెడ్ ఉష్ణోగ్రత (4 °C) వద్ద నిల్వ చేశారు. తరువాత, 1 ± 0.01 గ్రా హోమోజెనైజ్డ్ పాల పొడిని తూకం వేసి అసిటోనిట్రైల్:వాటర్ (50:50, v/v; 5 mL) తో కలిపారు. మిశ్రమాన్ని 1 నిమిషం పాటు కదిలించారు, తరువాత 30 నిమిషాలు అల్ట్రాసోనిక్ బాత్‌లో సోనికేట్ చేశారు మరియు చివరకు 1 నిమిషం పాటు కదిలించారు. ఆ మిశ్రమాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 10 నిమిషాలు 9000 × g వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేశారు మరియు సూపర్‌నాటెంట్‌ను 0.45 μm సిరంజి ఫిల్టర్‌ని ఉపయోగించి 2 ml ఆటోసాంప్లర్ వైయల్‌లోకి ఫిల్టర్ చేశారు. తరువాత ఫిల్ట్రేట్ (250 μl) ను నీటితో (750 μl) కలిపి HPLC వ్యవస్థలోకి ఇంజెక్ట్ చేశారు 10, 42.
ఈ పద్ధతిని ధృవీకరించడానికి, మేము రికవరీ, ఖచ్చితత్వం, గుర్తింపు పరిమితి (LOD), పరిమాణీకరణ పరిమితి (LOQ) మరియు సరైన పరిస్థితులలో ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ణయించాము. LOD అనేది బేస్‌లైన్ శబ్ద స్థాయి కంటే మూడు రెట్లు గరిష్ట ఎత్తు కలిగిన నమూనా కంటెంట్‌గా నిర్వచించబడింది. మరోవైపు, సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తి కంటే 10 రెట్లు గరిష్ట ఎత్తు కలిగిన నమూనా కంటెంట్‌ను LOQగా నిర్వచించారు.
ఏడు డేటా పాయింట్లతో కూడిన క్యాలిబ్రేషన్ వక్రరేఖను ఉపయోగించి పరికర ప్రతిస్పందనను నిర్ణయించారు. వేర్వేరు మెలమైన్ కంటెంట్‌లను ఉపయోగించారు (0, 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1 మరియు 1.2). మెలమైన్ గణన విధానం యొక్క సరళతను నిర్ణయించారు. అదనంగా, ఖాళీ నమూనాలకు అనేక విభిన్న స్థాయిల మెలమైన్ జోడించబడింది. శిశువు ఫార్ములా మరియు పొడి పాల నమూనాలలో 0.1–1.2 μg mL−1 ప్రామాణిక మెలమైన్ ద్రావణాన్ని నిరంతరం ఇంజెక్ట్ చేయడం ద్వారా మరియు దాని R2 = 0.9925 ద్వారా క్యాలిబ్రేషన్ వక్రరేఖను నిర్మించారు. ప్రక్రియ యొక్క పునరావృతత మరియు పునరుత్పత్తి ద్వారా ఖచ్చితత్వాన్ని అంచనా వేయబడింది మరియు మొదటి మరియు తదుపరి మూడు రోజులలో (త్రిపాదిలో) నమూనాలను ఇంజెక్ట్ చేయడం ద్వారా సాధించబడింది. జోడించిన మెలమైన్ యొక్క మూడు వేర్వేరు సాంద్రతలకు RSD %ని లెక్కించడం ద్వారా పద్ధతి యొక్క పునరావృత సామర్థ్యాన్ని అంచనా వేయబడింది. ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ణయించడానికి రికవరీ అధ్యయనాలు నిర్వహించబడ్డాయి. శిశు ఫార్ములా మరియు పొడి పాల నమూనాలలో మెలమైన్ సాంద్రత యొక్క మూడు స్థాయిలలో (0.1, 1.2, 2) వెలికితీత పద్ధతి ద్వారా రికవరీ స్థాయిని లెక్కించారు9,11,15.
అంచనా వేసిన రోజువారీ తీసుకోవడం (EDI) కింది సూత్రాన్ని ఉపయోగించి నిర్ణయించబడింది: EDI = Ci × Cc/BW.
Ci అంటే సగటు మెలమైన్ కంటెంట్, Cc అంటే పాల వినియోగం మరియు BW అంటే పిల్లల సగటు బరువు.
SPSS 24 ఉపయోగించి డేటా విశ్లేషణ జరిగింది. కోల్మోగోరోవ్-స్మిర్నోవ్ పరీక్షను ఉపయోగించి సాధారణతను పరీక్షించారు; అన్ని డేటా పారామెట్రిక్ కాని పరీక్షలు (p = 0). అందువల్ల, సమూహాల మధ్య గణనీయమైన తేడాలను గుర్తించడానికి క్రుస్కల్-వాలిస్ పరీక్ష మరియు మాన్-విట్నీ పరీక్షలను ఉపయోగించారు.
ఇంగెల్ఫింగర్, జూనియర్. మెలమైన్ మరియు ప్రపంచ ఆహార కాలుష్యంపై దాని ప్రభావం. న్యూ ఇంగ్లాండ్ జర్నల్ ఆఫ్ మెడిసిన్ 359(26), 2745–2748 (2008).
లించ్, RA, మరియు ఇతరులు. పిల్లల గిన్నెలలో మెలమైన్ వలసపై pH ప్రభావం. ఇంటర్నేషనల్ జర్నల్ ఆఫ్ ఫుడ్ కాంటామినేషన్, 2, 1–8 (2015).
బారెట్, MP మరియు గిల్బర్ట్, IH ట్రిపనోసోమ్‌ల లోపలికి విషపూరిత సమ్మేళనాలను లక్ష్యంగా చేసుకోవడం. పరాన్నజీవి శాస్త్రంలో పురోగతి 63, 125–183 (2006).
నిర్మన్, MF, మరియు ఇతరులు. ఔషధ డెలివరీ వాహనాలుగా మెలమైన్ డెండ్రైమర్‌ల యొక్క ఇన్ విట్రో మరియు ఇన్ వివో మూల్యాంకనం. ఇంటర్నేషనల్ జర్నల్ ఆఫ్ ఫార్మసీ, 281(1–2), 129–132(2004).
ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ. మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లం యొక్క విషపూరిత అంశాలను సమీక్షించడానికి నిపుణుల సమావేశాలు 1–4 (2008).
హోవే, AK-C., క్వాన్, TH మరియు లీ, PK-T. మెలమైన్ విషప్రభావం మరియు మూత్రపిండాలు. జర్నల్ ఆఫ్ ది అమెరికన్ సొసైటీ ఆఫ్ నెఫ్రాలజీ 20(2), 245–250 (2009).
ఓజ్‌టర్క్, ఎస్. మరియు డెమిర్, ఎన్. అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) ద్వారా పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి ఒక నవల IMAC యాడ్సోర్బెంట్ అభివృద్ధి. జర్నల్ ఆఫ్ ఫుడ్ సింథసిస్ అండ్ అనాలిసిస్ 100, 103931 (2021).
చాన్సువర్న్, వి., పానిక్, ఎస్. మరియు ఇమిమ్, ఎ. మానిచ్ గ్రీన్ రియాక్షన్ ఆధారంగా ద్రవ పాలలో మెలమైన్ యొక్క సాధారణ స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్ నిర్ణయం. స్పెక్ట్రోకెమ్. ఆక్టా పార్ట్ ఎ మోల్. బయోమోల్. స్పెక్ట్రోస్క్. 113, 154–158 (2013).
డీబెస్, ఎం. మరియు ఎల్-హబీబ్, ఆర్. HPLC/డయోడ్ అర్రే క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా శిశు ఫార్ములా, పాల పొడి మరియు పంగాసియస్ నమూనాలలో మెలమైన్ నిర్ధారణ. జర్నల్ ఆఫ్ ఎన్విరాన్‌మెంటల్ అనలిటికల్ టాక్సికాలజీ, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
స్కిన్నర్, కె.జి., థామస్, జె.డి., మరియు ఓస్టర్లోహ్, జె.డి. మెలమైన్ టాక్సిసిటీ. జర్నల్ ఆఫ్ మెడికల్ టాక్సికాలజీ, 6, 50–55 (2010).
ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO), మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లం యొక్క టాక్సికాలజీ మరియు ఆరోగ్య అంశాలు: హెల్త్ కెనడా, ఒట్టావా, కెనడా, 1-4 డిసెంబర్ 2008 (2009) మద్దతు ఇచ్చిన WHO/FAO సహకార నిపుణుల సమావేశం నివేదిక.
కోర్మా, SA, మరియు ఇతరులు. నవల క్రియాత్మక నిర్మాణ లిపిడ్లు మరియు వాణిజ్య శిశు ఫార్ములాను కలిగి ఉన్న శిశు ఫార్ములా పౌడర్ యొక్క లిపిడ్ కూర్పు మరియు నాణ్యత యొక్క తులనాత్మక అధ్యయనం. యూరోపియన్ ఫుడ్ రీసెర్చ్ అండ్ టెక్నాలజీ 246, 2569–2586 (2020).
ఎల్-వసీఫ్, ఎం. మరియు హాషెమ్, హెచ్. పామాయిల్ ఉపయోగించి శిశు ఫార్ములా యొక్క పోషక విలువ, నాణ్యత లక్షణాలు మరియు షెల్ఫ్ లైఫ్‌ను మెరుగుపరచడం. మిడిల్ ఈస్ట్ జర్నల్ ఆఫ్ అగ్రికల్చరల్ రీసెర్చ్ 6, 274–281 (2017).
యిన్, W., మరియు ఇతరులు. మెలమైన్‌కు వ్యతిరేకంగా మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీల ఉత్పత్తి మరియు ముడి పాలు, పొడి పాలు మరియు పశుగ్రాసంలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి పరోక్ష పోటీ ELISA పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం. జర్నల్ ఆఫ్ అగ్రికల్చరల్ అండ్ ఫుడ్ కెమిస్ట్రీ 58(14), 8152–8157 (2010).