nature.com ను సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు. మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ వెర్షన్‌లో CSS మద్దతు పరిమితంగా ఉంది. ఉత్తమ అనుభవం కోసం, తాజా బ్రౌజర్ వెర్షన్‌ను ఉపయోగించమని (లేదా ఇంటర్నెట్ ఎక్స్‌ప్లోరర్‌లో కంపాటిబిలిటీ మోడ్‌ను ఆఫ్ చేయమని) మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము. అదనంగా, నిరంతర మద్దతును నిర్ధారించడానికి, ఈ సైట్‌లో స్టైల్స్ లేదా జావాస్క్రిప్ట్ ఉండవు.
మెలమైన్ అనేది ఒక గుర్తించబడిన ఆహార కలుషితం, ఇది కొన్ని రకాల ఆహార పదార్థాలలో ప్రమాదవశాత్తుగా మరియు ఉద్దేశపూర్వకంగా కూడా ఉండవచ్చు. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడం మరియు దాని పరిమాణాన్ని నిర్ధారించడాన్ని ధృవీకరించడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం. ఇరాన్‌లోని వివిధ ప్రాంతాల నుండి సేకరించిన, శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడితో సహా, వాణిజ్యపరంగా లభించే మొత్తం 40 ఆహార నమూనాలను విశ్లేషించడం జరిగింది. నమూనాలలో సుమారుగా ఉన్న మెలమైన్ పరిమాణాన్ని హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-అల్ట్రావయోలెట్ (HPLC-UV) వ్యవస్థను ఉపయోగించి నిర్ధారించడం జరిగింది. 0.1–1.2 μg mL−1 పరిధిలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడం కోసం ఒక క్రమాంకన వక్రరేఖ (R2 = 0.9925) నిర్మించబడింది. పరిమాణ నిర్ధారణ మరియు గుర్తింపు పరిమితులు వరుసగా 1 μg mL−1 మరియు 3 μg mL−1 గా ఉన్నాయి. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను పరీక్షించగా, ఆ నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు వరుసగా 0.001–0.095 mg kg−1 మరియు 0.001–0.004 mg kg−1 గా ఉన్నాయని ఫలితాలు చూపించాయి. ఈ విలువలు EU చట్టం మరియు కోడెక్స్ అలిమెంటారియస్‌కు అనుగుణంగా ఉన్నాయి. తక్కువ మెలమైన్ పరిమాణం ఉన్న ఈ పాల ఉత్పత్తుల వినియోగం వినియోగదారుల ఆరోగ్యానికి గణనీయమైన ప్రమాదాన్ని కలిగించదని గమనించడం ముఖ్యం. ప్రమాద అంచనా ఫలితాలు కూడా దీనిని బలపరుస్తున్నాయి.
మెలమైన్ అనేది సైనమైడ్ నుండి ఉద్భవించిన, C3H6N6 అనే అణు ఫార్ములా కలిగిన ఒక సేంద్రీయ సమ్మేళనం. దీనికి నీటిలో చాలా తక్కువ ద్రావణీయత ఉంటుంది మరియు ఇందులో సుమారుగా 66% నత్రజని ఉంటుంది. మెలమైన్ అనేది విస్తృతంగా ఉపయోగించే ఒక పారిశ్రామిక సమ్మేళనం, దీనికి ప్లాస్టిక్‌లు, ఎరువులు మరియు ఆహార ప్రాసెసింగ్ పరికరాల (ఆహార ప్యాకేజింగ్ మరియు వంటసామానుతో సహా) ఉత్పత్తిలో అనేక రకాల చట్టబద్ధమైన ఉపయోగాలు ఉన్నాయి¹,². వ్యాధుల చికిత్స కోసం మెలమైన్‌ను ఔషధ వాహకంగా కూడా ఉపయోగిస్తారు. మెలమైన్‌లో అధిక నిష్పత్తిలో నత్రజని ఉండటం వలన ఈ సమ్మేళనం దుర్వినియోగానికి గురయ్యే అవకాశం ఉంది మరియు ఇది ఆహార పదార్థాలకు ప్రోటీన్ అణువుల లక్షణాలను అందిస్తుంది³,4. అందువల్ల, పాల ఉత్పత్తులతో సహా ఆహార ఉత్పత్తులకు మెలమైన్‌ను జోడించడం వల్ల నత్రజని శాతం పెరుగుతుంది. ఈ విధంగా, పాలలో ప్రోటీన్ శాతం వాస్తవానికి ఉన్నదానికంటే ఎక్కువగా ఉందని తప్పుగా నిర్ధారించబడింది.
కలిపే ప్రతి గ్రాము మెలమైన్‌కు, ఆహారంలోని ప్రోటీన్ శాతం 0.4% పెరుగుతుంది. అయితే, మెలమైన్ నీటిలో అధికంగా కరుగుతుంది మరియు మరింత తీవ్రమైన హానిని కలిగించగలదు. పాలు వంటి ద్రవ ఉత్పత్తులకు 1.3 గ్రాముల మెలమైన్‌ను కలపడం వల్ల పాలలోని ప్రోటీన్ శాతం 30% వరకు పెరగవచ్చు5,6. ప్రోటీన్ శాతాన్ని పెంచడానికి జంతువుల మరియు మానవ ఆహారాలలో కూడా మెలమైన్‌ను కలుపుతున్నప్పటికీ7, కోడెక్స్ అలిమెంటారియస్ కమిషన్ (CAC) మరియు జాతీయ అధికారులు మెలమైన్‌ను ఆహార సంకలితంగా ఆమోదించలేదు మరియు దీనిని మింగినా, పీల్చినా లేదా చర్మం ద్వారా గ్రహించినా ప్రమాదకరమైనదిగా జాబితా చేశారు. 2012లో, ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO) యొక్క ఇంటర్నేషనల్ ఏజెన్సీ ఫర్ రీసెర్చ్ ఆన్ క్యాన్సర్, మెలమైన్‌ను మానవ ఆరోగ్యానికి హానికరం కావచ్చు కాబట్టి దానిని క్లాస్ 2B కార్సినోజెన్‌గా జాబితా చేసింది8. మెలమైన్‌కు దీర్ఘకాలం పాటు గురికావడం వల్ల క్యాన్సర్ లేదా మూత్రపిండాల నష్టం కలగవచ్చు2. ఆహారంలోని మెలమైన్, సయనూరిక్ ఆమ్లంతో సంక్లిష్టంగా ఏర్పడి నీటిలో కరగని పసుపు రంగు స్ఫటికాలను ఏర్పరుస్తుంది. ఇవి మూత్రపిండాలు మరియు మూత్రాశయ కణజాలానికి నష్టం కలిగించడంతో పాటు, మూత్ర నాళాల క్యాన్సర్ మరియు బరువు తగ్గడానికి కూడా కారణమవుతాయి9,10. ఇది తీవ్రమైన ఆహార విషబాధకు కారణమవుతుంది మరియు అధిక సాంద్రతలలో, ముఖ్యంగా శిశువులు మరియు చిన్నపిల్లలలో మరణానికి కూడా దారితీస్తుంది.11 ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO) కూడా CAC మార్గదర్శకాల ఆధారంగా మానవులకు మెలమైన్ యొక్క సహించదగిన రోజువారీ తీసుకోవడం (TDI) పరిమితిని రోజుకు శరీర బరువుకు 0.2 mg/kg గా నిర్దేశించింది.12 యుఎస్ ఫుడ్ అండ్ డ్రగ్ అడ్మినిస్ట్రేషన్ (US FDA) శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ యొక్క గరిష్ట అవశేష స్థాయిని 1 mg/kg గా మరియు ఇతర ఆహారాలలో 2.5 mg/kg గా నిర్దేశించింది.2,7 సెప్టెంబర్ 2008లో, అనేక దేశీయ శిశువుల ఫార్ములా తయారీదారులు తమ ఉత్పత్తులలో ప్రోటీన్ శాతాన్ని పెంచడానికి పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను కలిపినట్లు నివేదించబడింది. దీని ఫలితంగా పాలపొడి విషబాధ జరిగి, దేశవ్యాప్తంగా మెలమైన్ విషబాధ సంఘటన చోటుచేసుకుంది. ఈ సంఘటనలో 294,000 మందికి పైగా పిల్లలు అనారోగ్యానికి గురవగా, 50,000 మందికి పైగా ఆసుపత్రి పాలయ్యారు. 13
పట్టణ జీవితంలోని కష్టాలు, తల్లి లేదా బిడ్డ అనారోగ్యం వంటి వివిధ కారణాల వల్ల తల్లిపాలు ఇవ్వడం ఎల్లప్పుడూ సాధ్యం కాదు, దీనివల్ల శిశువులకు ఆహారం ఇవ్వడానికి శిశు ఫార్ములాను ఉపయోగించాల్సి వస్తుంది. ఫలితంగా, కూర్పులో తల్లిపాలకు వీలైనంత దగ్గరగా ఉండే శిశు ఫార్ములాను ఉత్పత్తి చేయడానికి కర్మాగారాలు స్థాపించబడ్డాయి¹⁴. మార్కెట్లో అమ్మే శిశు ఫార్ములా సాధారణంగా ఆవు పాల నుండి తయారు చేయబడుతుంది మరియు సాధారణంగా కొవ్వులు, ప్రోటీన్లు, కార్బోహైడ్రేట్లు, విటమిన్లు, ఖనిజాలు మరియు ఇతర సమ్మేళనాల ప్రత్యేక మిశ్రమంతో తయారు చేయబడుతుంది. తల్లిపాలకు దగ్గరగా ఉండటానికి, ఫార్ములాలోని ప్రోటీన్ మరియు కొవ్వు శాతం మారుతూ ఉంటుంది, మరియు పాల రకాన్ని బట్టి, వాటిని విటమిన్లు మరియు ఇనుము వంటి ఖనిజాల సమ్మేళనాలతో బలవర్ధకం చేస్తారు¹⁵. శిశువులు సున్నితమైన సమూహం మరియు విషప్రయోగం జరిగే ప్రమాదం ఉన్నందున, పాలపొడి వినియోగ భద్రత ఆరోగ్యానికి అత్యంత కీలకం. చైనా శిశువులలో మెలమైన్ విషప్రయోగం కేసు తర్వాత, ప్రపంచవ్యాప్తంగా ఉన్న దేశాలు ఈ సమస్యపై నిశితంగా దృష్టి సారించాయి మరియు ఈ రంగంలో సున్నితత్వం కూడా పెరిగింది. అందువల్ల, శిశువుల ఆరోగ్యాన్ని కాపాడటానికి శిశు ఫార్ములా ఉత్పత్తిపై నియంత్రణను బలోపేతం చేయడం చాలా ముఖ్యం. ఆహారంలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC), ఎలక్ట్రోఫోరెసిస్, సెన్సరీ పద్ధతి, స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రీ మరియు యాంటిజెన్-యాంటీబాడీ ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసార్బెంట్ అస్సే16 వంటి వివిధ పద్ధతులు ఉన్నాయి. 2007లో, యుఎస్ ఫుడ్ అండ్ డ్రగ్ అడ్మినిస్ట్రేషన్ (FDA) ఆహారంలో మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లాన్ని నిర్ధారించడానికి ఒక HPLC పద్ధతిని అభివృద్ధి చేసి ప్రచురించింది, ఇది మెలమైన్ పరిమాణాన్ని నిర్ధారించడానికి అత్యంత ప్రభావవంతమైన పద్ధతి17.
కొత్త ఇన్‌ఫ్రారెడ్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ పద్ధతిని ఉపయోగించి కొలిచిన శిశువుల ఫార్ములాలోని మెలమైన్ గాఢతలు కిలోగ్రాముకు 0.33 నుండి 0.96 మిల్లీగ్రాముల (mg kg-1) వరకు ఉన్నాయి. 18 శ్రీలంకలో జరిపిన ఒక అధ్యయనంలో, పూర్తి పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.39 నుండి 0.84 mg kg-1 వరకు ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. అదనంగా, దిగుమతి చేసుకున్న శిశువుల ఫార్ములా నమూనాలలో వరుసగా 0.96 మరియు 0.94 mg/kg వద్ద అత్యధిక స్థాయిలో మెలమైన్ ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. ఈ స్థాయిలు నియంత్రణ పరిమితి (1 mg/kg) కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి, కానీ వినియోగదారుల భద్రత కోసం ఒక పర్యవేక్షణ కార్యక్రమం అవసరం. 19
ఇరాన్ శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ స్థాయిలను అనేక అధ్యయనాలు పరిశీలించాయి. సుమారు 65% నమూనాలలో మెలమైన్ ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది, దీని సగటు 0.73 mg/kg మరియు గరిష్టంగా 3.63 mg/kgగా ఉంది. మరో అధ్యయనం ప్రకారం, శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ స్థాయి 0.35 నుండి 3.40 μg/kg వరకు ఉండగా, దాని సగటు 1.38 μg/kgగా ఉంది. మొత్తమ్మీద, ఇరాన్ శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ ఉనికిని మరియు దాని స్థాయిని వివిధ అధ్యయనాలలో అంచనా వేశారు. కొన్ని నమూనాలలో ఉన్న మెలమైన్, నియంత్రణ అధికారులు నిర్దేశించిన గరిష్ట పరిమితిని (2.5 mg/kg/feed) మించిపోయింది.
ఆహార పరిశ్రమలో పాలపొడి యొక్క భారీ ప్రత్యక్ష మరియు పరోక్ష వినియోగాన్ని, మరియు పిల్లలకు ఆహారం అందించడంలో శిశు ఫార్ములాకు ఉన్న ప్రత్యేక ప్రాముఖ్యతను పరిగణనలోకి తీసుకుని, పాలపొడి మరియు శిశు ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను గుర్తించే పద్ధతిని ధృవీకరించడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం. వాస్తవానికి, హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) మరియు అల్ట్రావైలెట్ (UV) డిటెక్షన్‌ను ఉపయోగించి శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ కల్తీని గుర్తించడానికి వేగవంతమైన, సరళమైన మరియు కచ్చితమైన పరిమాణాత్మక పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం ఈ అధ్యయనం యొక్క మొదటి లక్ష్యం; రెండవదిగా, ఇరాన్ మార్కెట్‌లో విక్రయించబడే శిశు ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలోని మెలమైన్ పరిమాణాన్ని నిర్ధారించడం ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం.
మెలమైన్ విశ్లేషణ కోసం ఉపయోగించే పరికరాలు ఆహార ఉత్పత్తి ప్రదేశాన్ని బట్టి మారుతూ ఉంటాయి. పాలు మరియు శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ అవశేషాలను కొలవడానికి సున్నితమైన మరియు నమ్మదగిన HPLC-UV విశ్లేషణ పద్ధతిని ఉపయోగించారు. పాల ఉత్పత్తులలో వివిధ ప్రోటీన్లు మరియు కొవ్వులు ఉంటాయి, ఇవి మెలమైన్ కొలతకు ఆటంకం కలిగించవచ్చు. అందువల్ల, సన్ మరియు ఇతరులు 22 పేర్కొన్నట్లుగా, పరికరాల విశ్లేషణకు ముందు సరైన మరియు సమర్థవంతమైన శుభ్రపరిచే వ్యూహం అవసరం. ఈ అధ్యయనంలో, మేము పారవేయగలిగే సిరంజి ఫిల్టర్లను ఉపయోగించాము. ఈ అధ్యయనంలో, శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను వేరు చేయడానికి మేము C18 కాలమ్‌ను ఉపయోగించాము. పటం 1 మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం క్రోమాటోగ్రామ్‌ను చూపుతుంది. అదనంగా, 0.1–1.2 mg/kg మెలమైన్ కలిగిన నమూనాల రికవరీ 95% నుండి 109% వరకు ఉంది, రిగ్రెషన్ సమీకరణం y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925), మరియు సాపేక్ష ప్రామాణిక విచలనం (RSD) విలువలు 0.8 నుండి 2% వరకు ఉన్నాయి. అందుబాటులో ఉన్న డేటా ప్రకారం, అధ్యయనం చేసిన గాఢత పరిధిలో ఈ పద్ధతి విశ్వసనీయమైనదని తెలుస్తోంది (పట్టిక 1). మెలమైన్ యొక్క పరికర గుర్తింపు పరిమితి (LOD) మరియు పరిమాణీకరణ పరిమితి (LOQ) వరుసగా 1 μg mL−1 మరియు 3 μg mL−1 గా ఉన్నాయి. అదనంగా, మెలమైన్ యొక్క UV స్పెక్ట్రం 242 nm వద్ద ఒక శోషణ పట్టీని ప్రదర్శించింది. ఈ గుర్తింపు పద్ధతి సున్నితమైనది, విశ్వసనీయమైనది మరియు కచ్చితమైనది. మెలమైన్ స్థాయిని రోజూవారీగా నిర్ధారించడానికి ఈ పద్ధతిని ఉపయోగించవచ్చు.
ఇలాంటి ఫలితాలను పలువురు రచయితలు ప్రచురించారు. పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ విశ్లేషణ కోసం హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-ఫోటోడయోడ్ అర్రే (HPLC) పద్ధతిని అభివృద్ధి చేశారు. 240 nm వద్ద, పరిమాణీకరణ యొక్క దిగువ పరిమితులు పాలపొడికి 340 μg kg−1 మరియు శిశువుల ఫార్ములాకు 280 μg kg−1 గా ఉన్నాయి. ఫిలాజీ మరియు ఇతరులు (2012) HPLC ద్వారా శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ కనుగొనబడలేదని నివేదించారు. అయితే, 8% పాలపొడి నమూనాలలో 0.505–0.86 mg/kg స్థాయిలో మెలమైన్ ఉంది. టిటిల్మీట్ మరియు ఇతరులు23 ఇలాంటి అధ్యయనాన్ని నిర్వహించి, హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ-మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ/MS (HPLC-MS/MS) ద్వారా శిశువుల ఫార్ములా (నమూనా సంఖ్య: 72) యొక్క మెలమైన్ పరిమాణాన్ని సుమారుగా 0.0431–0.346 mg kg−1 గా నిర్ధారించారు. వెంకటస్వామి మరియు ఇతరులు నిర్వహించిన ఒక అధ్యయనంలో... (2010), శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలలో మెలమైన్‌ను అంచనా వేయడానికి గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ విధానం (ఎసిటోనైట్రైల్ లేకుండా) మరియు రివర్స్డ్-ఫేజ్ హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (RP-HPLC) ఉపయోగించబడ్డాయి. నమూనా గాఢత పరిధి 1.0 నుండి 80 గ్రా/మి.లీ వరకు ఉంది మరియు ప్రతిస్పందన సరళంగా ఉంది (r > 0.999). ఈ పద్ధతి 5–40 గ్రా/మి.లీ గాఢత పరిధిలో 97.2–101.2 రికవరీలను చూపించింది మరియు పునరుత్పత్తి సామర్థ్యం 1.0% సాపేక్ష ప్రామాణిక విచలనం కంటే తక్కువగా ఉంది. ఇంకా, గమనించిన LOD మరియు LOQ వరుసగా 0.1 గ్రా మి.లీ−1 మరియు 0.2 గ్రా మి.లీ−124 గా ఉన్నాయి. లట్టర్ మరియు ఇతరులు (2011) HPLC-UVని ఉపయోగించి ఆవు పాలు మరియు పాల ఆధారిత శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ కాలుష్యాన్ని నిర్ధారించారు. మెలమైన్ గాఢతలు < 0.2 నుండి 2.52 మి.గ్రా కి.గ్రా−1 వరకు ఉన్నాయి. HPLC-UV పద్ధతి యొక్క లీనియర్ డైనమిక్ రేంజ్ ఆవు పాలకు 0.05 నుండి 2.5 mg kg−1, <15% ప్రోటీన్ ద్రవ్యరాశి భిన్నం ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.13 నుండి 6.25 mg kg−1, మరియు 15% ప్రోటీన్ ద్రవ్యరాశి భిన్నం ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.25 నుండి 12.5 mg kg−1 గా ఉంది. LOD (మరియు LOQ) ఫలితాలు ఆవు పాలకు 0.03 mg kg−1 (0.09 mg kg−1), <15% ప్రోటీన్ ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.06 mg kg−1 (0.18 mg kg−1), మరియు 15% ప్రోటీన్ ఉన్న శిశు ఫార్ములాకు 0.12 mg kg−1 (0.36 mg kg−1) గా ఉన్నాయి, వరుసగా LOD మరియు LOQ కోసం సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తి 3 మరియు 1025 గా ఉంది. డైబ్స్ మరియు ఇతరులు. (2012) HPLC/DMDని ఉపయోగించి శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడి నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలను పరిశోధించారు. శిశువుల ఫార్ములాలో, అత్యల్ప మరియు అత్యధిక స్థాయిలు వరుసగా 9.49 mg kg−1 మరియు 258 mg kg−1 గా ఉన్నాయి. గుర్తించే పరిమితి (LOD) 0.05 mg kg−1గా ఉంది.
జావిద్ మరియు ఇతరులు ఫోరియర్ ట్రాన్స్‌ఫార్మ్ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ (FT-MIR) ద్వారా శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ అవశేషాలు 0.002–2 mg kg−1 పరిధిలో ఉన్నాయని నివేదించారు (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3.5 mg kg−1). రెజాయ్ మరియు ఇతరులు27 మెలమైన్‌ను అంచనా వేయడానికి HPLC-DDA (λ = 220 nm) పద్ధతిని ప్రతిపాదించారు మరియు పాల పొడి కోసం 0.08 μg mL−1 యొక్క LOQని సాధించారు, ఇది ఈ అధ్యయనంలో పొందిన స్థాయి కంటే తక్కువ. సన్ మరియు ఇతరులు సాలిడ్ ఫేజ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ (SPE) ద్వారా ద్రవ పాలలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి RP-HPLC-DADని అభివృద్ధి చేశారు. వారు వరుసగా 18 మరియు 60 μg kg−128 యొక్క LOD మరియు LOQని పొందారు, ఇది ప్రస్తుత అధ్యయనం కంటే ఎక్కువ సున్నితమైనది. మోంటెసానో మరియు ఇతరులు ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించిన పద్ధతి కంటే తక్కువ సున్నితమైన, 0.05–3 mg/kg పరిమాణ పరిమితితో ప్రోటీన్ సప్లిమెంట్లలో మెలమైన్ కంటెంట్ అంచనా కోసం HPLC-DMD పద్ధతి యొక్క ప్రభావాన్ని ధృవీకరించింది29.
నిస్సందేహంగా, విశ్లేషణాత్మక ప్రయోగశాలలు వివిధ నమూనాలలో కాలుష్య కారకాలను పర్యవేక్షించడం ద్వారా పర్యావరణాన్ని పరిరక్షించడంలో ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తాయి. అయితే, విశ్లేషణ సమయంలో పెద్ద సంఖ్యలో రిఏజెంట్లు మరియు ద్రావకాలను ఉపయోగించడం వలన ప్రమాదకరమైన అవశేషాలు ఏర్పడవచ్చు. అందువల్ల, ఆపరేటర్లు మరియు పర్యావరణంపై విశ్లేషణాత్మక ప్రక్రియల యొక్క ప్రతికూల ప్రభావాలను తగ్గించడానికి లేదా తొలగించడానికి 2000 సంవత్సరంలో గ్రీన్ అనలిటికల్ కెమిస్ట్రీ (GAC) అభివృద్ధి చేయబడింది26. మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి క్రోమాటోగ్రఫీ, ఎలక్ట్రోఫోరెసిస్, క్యాపిల్లరీ ఎలక్ట్రోఫోరెసిస్ మరియు ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసార్బెంట్ అస్సే (ELISA) వంటి సాంప్రదాయ మెలమైన్ గుర్తింపు పద్ధతులు ఉపయోగించబడ్డాయి. అయితే, అనేక గుర్తింపు పద్ధతులలో, ఎలక్ట్రోకెమికల్ సెన్సార్లు వాటి అద్భుతమైన సున్నితత్వం, ఎంపిక సామర్థ్యం, ​​వేగవంతమైన విశ్లేషణ సమయం మరియు వినియోగదారు-స్నేహపూర్వక లక్షణాల కారణంగా ఎక్కువ దృష్టిని ఆకర్షించాయి30,31. గ్రీన్ నానోటెక్నాలజీ నానోమెటీరియల్స్‌ను సంశ్లేషణ చేయడానికి జీవసంబంధ మార్గాలను ఉపయోగించుకుంటుంది, ఇది ప్రమాదకరమైన వ్యర్థాల ఉత్పత్తిని మరియు శక్తి వినియోగాన్ని తగ్గించగలదు, తద్వారా సుస్థిర పద్ధతుల అమలును ప్రోత్సహిస్తుంది. ఉదాహరణకు, పర్యావరణ అనుకూల పదార్థాలతో తయారు చేయబడిన నానోకాంపోజిట్‌లను, మెలమైన్32,33,34 వంటి పదార్థాలను గుర్తించడానికి బయోసెన్సార్లలో ఉపయోగించవచ్చు.
సాంప్రదాయ వెలికితీత పద్ధతులతో పోలిస్తే అధిక శక్తి సామర్థ్యం మరియు సుస్థిరత కారణంగా సాలిడ్-ఫేజ్ మైక్రోఎక్స్‌ట్రాక్షన్ (SPME) సమర్థవంతంగా ఉపయోగించబడుతుందని ఈ అధ్యయనం చూపిస్తుంది. SPME యొక్క పర్యావరణ అనుకూలత మరియు శక్తి సామర్థ్యం దీనిని విశ్లేషణాత్మక రసాయన శాస్త్రంలో సాంప్రదాయ వెలికితీత పద్ధతులకు ఒక అద్భుతమైన ప్రత్యామ్నాయంగా చేస్తాయి మరియు నమూనా తయారీకి మరింత సుస్థిరమైన మరియు సమర్థవంతమైన పద్ధతిని అందిస్తాయి35.
2013లో, వు మరియు ఇతరులు ఇమ్యునోఅస్సేను ఉపయోగించి శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను వేగంగా గుర్తించడానికి, మెలమైన్ మరియు యాంటీ-మెలమైన్ యాంటీబాడీల మధ్య సంయోగాన్ని ఉపయోగించుకునే అత్యంత సున్నితమైన మరియు ఎంపిక చేయగల సర్ఫేస్ ప్లాస్మాన్ రెసొనెన్స్ (మినీ-SPR) బయోసెన్సార్‌ను అభివృద్ధి చేశారు. ఇమ్యునోఅస్సే (మెలమైన్-సంయోగం చెందిన బోవైన్ సీరం ఆల్బుమిన్‌ను ఉపయోగించి)తో కలిపిన ఈ SPR బయోసెన్సార్, కేవలం 0.02 μg mL-136 గుర్తింపు పరిమితితో, ఉపయోగించడానికి సులభమైన మరియు తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన సాంకేతికత.
వాణిజ్య నమూనాలలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి నసిరి మరియు అబ్బాసియన్ గ్రాఫేన్ ఆక్సైడ్-చిటోసాన్ కాంపోజిట్స్ (GOCS)తో కలిపి అధిక సామర్థ్యం గల పోర్టబుల్ సెన్సార్‌ను ఉపయోగించారు37. ఈ పద్ధతి అత్యధిక ఎంపిక, ఖచ్చితత్వం మరియు ప్రతిస్పందనను చూపించింది. GOCS సెన్సార్ అద్భుతమైన సున్నితత్వాన్ని (239.1 μM−1), 0.01 నుండి 200 μM వరకు లీనియర్ పరిధిని, 1.73 × 104 అఫినిటీ స్థిరాంకాన్ని మరియు 10 nM వరకు LODని ప్రదర్శించింది. అంతేకాకుండా, 2024లో చంద్రశేఖర్ మరియు ఇతరులు నిర్వహించిన ఒక అధ్యయనం పర్యావరణ అనుకూలమైన మరియు తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన విధానాన్ని అవలంబించింది. వారు పర్యావరణ అనుకూల పద్ధతిలో జింక్ ఆక్సైడ్ నానోపార్టికల్స్ (ZnO-NPs)ను సంశ్లేషణ చేయడానికి బొప్పాయి తొక్క సారాన్ని క్షయకరణ కారకంగా ఉపయోగించారు. తదనంతరం, శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను నిర్ధారించడానికి ఒక ప్రత్యేకమైన మైక్రో-రామన్ స్పెక్ట్రోస్కోపీ పద్ధతిని అభివృద్ధి చేశారు. వ్యవసాయ వ్యర్థాల నుండి పొందిన ZnO-NPs, మెలమైన్‌ను పర్యవేక్షించడానికి మరియు గుర్తించడానికి ఒక విలువైన రోగనిర్ధారణ సాధనంగా మరియు నమ్మకమైన, తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన సాంకేతికతగా సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శించాయి38.
అలిజాదే మరియు ఇతరులు (2024) పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను నిర్ధారించడానికి అత్యంత సున్నితమైన మెటల్-ఆర్గానిక్ ఫ్రేమ్‌వర్క్ (MOF) ఫ్లోరోసెన్స్ ప్లాట్‌ఫామ్‌ను ఉపయోగించారు. 3σ/S ఉపయోగించి నిర్ధారించిన సెన్సార్ యొక్క లీనియర్ రేంజ్ మరియు తక్కువ డిటెక్షన్ లిమిట్ వరుసగా 40 నుండి 396.45 nM (25 μg kg−1 నుండి 0.25 mg kg−1 కు సమానం) మరియు 40 nM (25 μg kg−1 కు సమానం) గా ఉన్నాయి. ఈ పరిధి, శిశువుల ఫార్ములా (1 mg kg−1) మరియు ఇతర ఆహార/మేత నమూనాలలో (2.5 mg kg−1) మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి నిర్దేశించిన గరిష్ట అవశేష స్థాయిల (MRLs) కంటే చాలా తక్కువగా ఉంది. ఫ్లోరోసెంట్ సెన్సార్ (టెర్బియం (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF), పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడంలో HPLC39 కంటే అధిక కచ్చితత్వాన్ని మరియు మరింత ఖచ్చితమైన కొలత సామర్థ్యాన్ని ప్రదర్శించింది. హరిత రసాయన శాస్త్రంలోని బయోసెన్సార్లు మరియు నానోకాంపోజిట్లు గుర్తింపు సామర్థ్యాలను మెరుగుపరచడమే కాకుండా, సుస్థిర అభివృద్ధి సూత్రాలకు అనుగుణంగా పర్యావరణ ప్రమాదాలను కూడా తగ్గిస్తాయి.
మెలమైన్ నిర్ధారణ కోసం వివిధ పద్ధతులకు హరిత రసాయన శాస్త్ర సూత్రాలను వర్తింపజేయడం జరిగింది. ఒక విధానం ఏమిటంటే, శిశువుల ఫార్ములా మరియు వేడి నీరు వంటి నమూనాల నుండి మెలమైన్‌ను సమర్థవంతంగా సంగ్రహించడం కోసం, సిట్రిక్ ఆమ్లంతో క్రాస్‌లింక్ చేయబడిన సహజ ధ్రువ పాలిమర్ అయిన β-సైక్లోడెక్స్ట్రిన్‌ను ఉపయోగించి ఒక హరిత విక్షేపణ ఘన-దశ సూక్ష్మసంగ్రహణ పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం. మరొక పద్ధతి పాల నమూనాలలో మెలమైన్ నిర్ధారణ కోసం మానిచ్ చర్యను ఉపయోగిస్తుంది. ఈ పద్ధతి చవకైనది, పర్యావరణ అనుకూలమైనది మరియు 0.1–2.5 ppm యొక్క సరళ శ్రేణి మరియు తక్కువ గుర్తింపు పరిమితితో అత్యంత కచ్చితమైనది. అంతేకాకుండా, ద్రవ పాలు మరియు శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్‌ను పరిమాణాత్మకంగా నిర్ధారించడానికి, ఫోరియర్ ట్రాన్స్‌ఫార్మ్ ఇన్‌ఫ్రారెడ్ ట్రాన్స్‌మిషన్ స్పెక్ట్రోస్కోపీని ఉపయోగించి, వరుసగా 1 ppm మరియు 3.5 ppm అధిక కచ్చితత్వం మరియు గుర్తింపు పరిమితులతో ఒక తక్కువ ఖర్చుతో కూడిన మరియు పర్యావరణ అనుకూలమైన పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం జరిగింది. ఈ పద్ధతులు మెలమైన్ నిర్ధారణ కోసం సమర్థవంతమైన మరియు సుస్థిరమైన పద్ధతుల అభివృద్ధికి హరిత రసాయన శాస్త్ర సూత్రాల అనువర్తనాన్ని ప్రదర్శిస్తాయి.
మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం అనేక అధ్యయనాలు వినూత్న పద్ధతులను ప్రతిపాదించాయి, ఉదాహరణకు సాలిడ్-ఫేజ్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ మరియు హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC)43, అలాగే వేగవంతమైన హై-పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) వాడకం, దీనికి సంక్లిష్టమైన ప్రీ-ట్రీట్‌మెంట్ లేదా అయాన్-పెయిర్ రియాజెంట్లు అవసరం లేదు, తద్వారా రసాయన వ్యర్థాల పరిమాణాన్ని తగ్గిస్తుంది44. ఈ పద్ధతులు పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ నిర్ధారణకు కచ్చితమైన ఫలితాలను అందించడమే కాకుండా, గ్రీన్ కెమిస్ట్రీ సూత్రాలకు కూడా అనుగుణంగా ఉంటాయి, ప్రమాదకరమైన రసాయనాల వాడకాన్ని తగ్గించి, విశ్లేషణాత్మక ప్రక్రియ యొక్క మొత్తం పర్యావరణ ప్రభావాన్ని తగ్గిస్తాయి.
వివిధ బ్రాండ్‌లకు చెందిన నలభై నమూనాలను మూడుసార్లు పరీక్షించగా, ఆ ఫలితాలు పట్టిక 2లో పొందుపరచబడ్డాయి. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడి నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు వరుసగా 0.001 నుండి 0.004 mg/kg మరియు 0.001 నుండి 0.095 mg/kg పరిధిలో ఉన్నాయి. శిశువుల ఫార్ములా యొక్క మూడు వయస్సుల సమూహాల మధ్య ఎటువంటి గణనీయమైన మార్పులు గమనించబడలేదు. అదనంగా, 80% పాలపొడిలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది, కానీ 65% శిశువుల ఫార్ములాలు మెలమైన్‌తో కలుషితమయ్యాయి.
పారిశ్రామిక పాలపొడిలో మెలమైన్ పరిమాణం శిశువుల ఫార్ములా కంటే ఎక్కువగా ఉంది మరియు ఈ వ్యత్యాసం గణనీయమైనది (p<0.05) (పటం 2).
పొందిన ఫలితాలు FDA నిర్దేశించిన పరిమితుల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి (1 మరియు 2.5 mg/kg కంటే తక్కువ). అదనంగా, ఈ ఫలితాలు CAC (2010) మరియు EU45,46 నిర్దేశించిన పరిమితులకు అనుగుణంగా ఉన్నాయి, అనగా శిశువుల ఫార్ములాకు గరిష్టంగా అనుమతించబడిన పరిమితి 1 mg kg-1 మరియు పాల ఉత్పత్తులకు 2.5 mg kg-1.
ఘనతి మరియు ఇతరులు47 చేసిన 2023 అధ్యయనం ప్రకారం, ఇరాన్‌లోని వివిధ రకాల ప్యాక్ చేసిన పాలలో మెలమైన్ పరిమాణం 50.7 నుండి 790 μg kg−1 వరకు ఉంది. వారి ఫలితాలు FDA అనుమతించదగిన పరిమితి కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి. మా ఫలితాలు షోడర్ మరియు ఇతరులు48 మరియు రిమా మరియు ఇతరులు49 వారి ఫలితాల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి. షోడర్ మరియు ఇతరులు (2010) ELISA ద్వారా నిర్ణయించబడిన పాలపొడిలో (n=49) మెలమైన్ స్థాయిలు 0.5 నుండి 5.5 mg/kg వరకు ఉన్నాయని కనుగొన్నారు. రిమా మరియు ఇతరులు ఫ్లోరోసెన్స్ స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రీ ద్వారా పాలపొడిలోని మెలమైన్ అవశేషాలను విశ్లేషించి, పాలపొడిలో మెలమైన్ పరిమాణం 0.72–5.76 mg/kg ఉందని కనుగొన్నారు. లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC/MS)ని ఉపయోగించి శిశువుల ఫార్ములాలో (n=94) మెలమైన్ స్థాయిలను పర్యవేక్షించడానికి 2011లో కెనడాలో ఒక అధ్యయనం నిర్వహించబడింది. మెలమైన్ గాఢతలు ఆమోదయోగ్యమైన పరిమితి కంటే తక్కువగా ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది (ప్రాథమిక ప్రమాణం: 0.5 mg kg−1). ప్రోటీన్ కంటెంట్‌ను పెంచడానికి ఉపయోగించిన ఒక ఎత్తుగడగా ఈ మోసపూరిత మెలమైన్ స్థాయిలను గుర్తించి ఉండటానికి అవకాశం లేదు. అయితే, దీనిని ఎరువుల వాడకం, కంటైనర్‌లోని పదార్థాలను వేరే చోటికి తరలించడం లేదా ఇలాంటి ఇతర కారకాలతో వివరించలేము. అంతేకాకుండా, కెనడాలోకి దిగుమతి చేసుకున్న పాలపొడిలోని మెలమైన్ మూలాన్ని వెల్లడించలేదు50.
హసానీ మరియు ఇతరులు 2013లో ఇరాన్ మార్కెట్‌లోని పాలపొడి మరియు ద్రవ పాలలో మెలమైన్ పరిమాణాన్ని కొలిచి, ఇలాంటి ఫలితాలనే కనుగొన్నారు. ఒక బ్రాండ్ పాలపొడి మరియు ద్రవ పాలు మినహా, మిగిలిన అన్ని నమూనాలు మెలమైన్‌తో కలుషితమయ్యాయని ఫలితాలు చూపించాయి. పాలపొడిలో దీని స్థాయిలు 1.50 నుండి 30.32 μg g−1 వరకు మరియు పాలలో 0.11 నుండి 1.48 μg ml−1 వరకు ఉన్నాయి. ముఖ్యంగా, ఏ నమూనాలోనూ సైనూరిక్ ఆమ్లం కనుగొనబడలేదు, దీనివల్ల వినియోగదారులకు మెలమైన్ విషప్రభావం కలిగే అవకాశం తగ్గింది. 51 గత అధ్యయనాలు పాలపొడి కలిగిన చాక్లెట్ ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ గాఢతను అంచనా వేశాయి. దిగుమతి చేసుకున్న నమూనాలలో సుమారు 94% మరియు ఇరాన్ నమూనాలలో 77% మెలమైన్‌ను కలిగి ఉన్నాయి. దిగుమతి చేసుకున్న నమూనాలలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.032 నుండి 2.692 mg/kg వరకు ఉండగా, ఇరాన్ నమూనాలలో అవి 0.013 నుండి 2.600 mg/kg వరకు ఉన్నాయి. మొత్తం మీద, 85% నమూనాలలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది, కానీ ఒక నిర్దిష్ట బ్రాండ్‌లో మాత్రమే అనుమతించదగిన పరిమితి కంటే ఎక్కువ స్థాయిలు ఉన్నాయి.44 టిటిల్‌మియర్ మరియు ఇతరులు పాల పొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలు 0.00528 నుండి 0.0122 mg/kg వరకు ఉన్నాయని నివేదించారు.
పట్టిక 3 మూడు వయస్సుల సమూహాలకు సంబంధించిన ప్రమాద అంచనా ఫలితాలను సంగ్రహిస్తుంది. అన్ని వయస్సుల సమూహాలలో ప్రమాదం 1 కంటే తక్కువగా ఉంది. అందువల్ల, శిశువుల ఫార్ములాలోని మెలమైన్ వల్ల క్యాన్సర్ కాని ఆరోగ్య ప్రమాదం ఏదీ లేదు.
పాల ఉత్పత్తులలో తక్కువ స్థాయి కాలుష్యం తయారీ సమయంలో అనుకోకుండా జరిగే కాలుష్యం వల్ల కావచ్చు, అయితే అధిక స్థాయిలు ఉద్దేశపూర్వకంగా చేసే చేర్పుల వల్ల కావచ్చు. అంతేకాకుండా, తక్కువ మెలమైన్ స్థాయిలు ఉన్న పాల ఉత్పత్తులను తీసుకోవడం వల్ల మానవ ఆరోగ్యానికి కలిగే మొత్తం ప్రమాదం తక్కువగా పరిగణించబడుతుంది. ఇంత తక్కువ స్థాయిలో మెలమైన్ ఉన్న ఉత్పత్తులను తీసుకోవడం వినియోగదారుల ఆరోగ్యానికి ఎటువంటి ప్రమాదాన్ని కలిగించదని నిర్ధారించవచ్చు52.
పాడి పరిశ్రమలో, ముఖ్యంగా ప్రజారోగ్యాన్ని పరిరక్షించే విషయంలో, ఆహార భద్రతా నిర్వహణకు ఉన్న ప్రాముఖ్యతను దృష్టిలో ఉంచుకుని, పాలపొడి మరియు శిశువుల ఫార్ములాలో మెలమైన్ స్థాయిలు మరియు అవశేషాలను అంచనా వేయడానికి, పోల్చడానికి ఒక పద్ధతిని అభివృద్ధి చేసి, ధృవీకరించడం అత్యంత ఆవశ్యకం. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్‌ను నిర్ధారించడానికి ఒక సరళమైన మరియు కచ్చితమైన HPLC-UV స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్ పద్ధతిని అభివృద్ధి చేయడం జరిగింది. ఈ పద్ధతి యొక్క విశ్వసనీయత మరియు కచ్చితత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి దానిని ధృవీకరించడం జరిగింది. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడిలో మెలమైన్ స్థాయిలను కొలవడానికి ఈ పద్ధతి యొక్క గుర్తింపు మరియు పరిమాణీకరణ పరిమితులు తగినంత సున్నితంగా ఉన్నాయని తేలింది. మా డేటా ప్రకారం, ఇరాన్‌కు చెందిన చాలా నమూనాలలో మెలమైన్ కనుగొనబడింది. కనుగొనబడిన మెలమైన్ స్థాయిలన్నీ CAC నిర్దేశించిన గరిష్ట అనుమతించదగిన పరిమితుల కంటే తక్కువగా ఉన్నాయి. ఇది, ఈ రకమైన పాల ఉత్పత్తుల వినియోగం మానవ ఆరోగ్యానికి ఎటువంటి ప్రమాదాన్ని కలిగించదని సూచిస్తుంది.
ఉపయోగించిన అన్ని రసాయన కారకాలు విశ్లేషణాత్మక గ్రేడ్‌కు చెందినవి: మెలమైన్ (2,4,6-ట్రైఅమైనో-1,3,5-ట్రైయాజైన్) 99% స్వచ్ఛమైనది (సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, సెయింట్ లూయిస్, MO); HPLC-గ్రేడ్ అసిటోనైట్రైల్ (మెర్క్, డార్మ్‌స్టాడ్, జర్మనీ); అత్యంత స్వచ్ఛమైన నీరు (మిల్లిపోర్, మోర్ఫ్‌హీమ్, ఫ్రాన్స్). పారవేయగల సిరంజి ఫిల్టర్లు (క్రోమాఫిల్ ఎక్స్‌ట్రా PVDF-45/25, రంధ్ర పరిమాణం 0.45 μm, పొర వ్యాసం 25 mm) (మాచెరీ-నాగెల్, డ్యూరెన్, జర్మనీ).
నమూనాలను సిద్ధం చేయడానికి అల్ట్రాసోనిక్ బాత్ (ఎల్మా, జర్మనీ), సెంట్రిఫ్యూజ్ (బెక్మాన్ కౌల్టర్, క్రెఫెల్డ్, జర్మనీ) మరియు HPLC (నావర్, జర్మనీ) లను ఉపయోగించారు.
UV డిటెక్టర్‌తో కూడిన ఒక హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రాఫ్ (KNAUER, జర్మనీ) ఉపయోగించబడింది. HPLC విశ్లేషణ పరిస్థితులు ఈ క్రింది విధంగా ఉన్నాయి: ODS-3 C18 అనలిటికల్ కాలమ్ (4.6 mm × 250 mm, పార్టికల్ సైజు 5 μm) (MZ, జర్మనీ)తో కూడిన ఒక UHPLC అల్టిమేట్ సిస్టమ్ ఉపయోగించబడింది. HPLC ఎలుయెంట్ (మొబైల్ ఫేజ్) 1 mL min-1 ప్రవాహ రేటుతో కూడిన TFA/మిథనాల్ మిశ్రమం (450:50 mL). డిటెక్షన్ తరంగదైర్ఘ్యం 242 nm. ఇంజెక్షన్ పరిమాణం 100 μL, కాలమ్ ఉష్ణోగ్రత 20 °C. ఔషధం యొక్క రిటెన్షన్ సమయం ఎక్కువ (15 నిమిషాలు) కాబట్టి, తదుపరి ఇంజెక్షన్ 25 నిమిషాల తర్వాత చేయాలి. మెలమైన్ స్టాండర్డ్స్ యొక్క రిటెన్షన్ సమయం మరియు UV స్పెక్ట్రమ్ పీక్‌ను పోల్చడం ద్వారా మెలమైన్‌ను గుర్తించారు.
నీటిని ఉపయోగించి మెలమైన్ (10 μg/mL) యొక్క ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని తయారు చేసి, కాంతికి దూరంగా రిఫ్రిజిరేటర్‌లో (4 °C) నిల్వ చేశారు. స్టాక్ ద్రావణాన్ని మొబైల్ ఫేజ్‌తో పలుచన చేసి, వర్కింగ్ స్టాండర్డ్ ద్రావణాలను తయారు చేయండి. ప్రతి ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని HPLC లోకి 7 సార్లు ఇంజెక్ట్ చేశారు. నిర్ధారించబడిన పీక్ ఏరియా మరియు నిర్ధారించబడిన గాఢత యొక్క రిగ్రెషన్ విశ్లేషణ ద్వారా క్రమాంకన సమీకరణం 10ను లెక్కించారు.
ఇరాన్‌లోని స్థానిక సూపర్‌మార్కెట్లు మరియు ఫార్మసీల నుండి, వివిధ వయస్సుల (0–6 నెలలు, 6–12 నెలలు, మరియు >12 నెలలు) శిశువులకు తినిపించడం కోసం వాణిజ్యపరంగా లభించే ఆవు పాల పొడి (20 నమూనాలు) మరియు వివిధ బ్రాండ్‌ల ఆవు పాల ఆధారిత శిశు ఫార్ములా నమూనాలను (20 నమూనాలు) కొనుగోలు చేసి, విశ్లేషణ చేసే వరకు రిఫ్రిజిరేటెడ్ ఉష్ణోగ్రత (4 °C) వద్ద నిల్వ చేశారు. ఆ తర్వాత, 1 ± 0.01 గ్రాముల హోమోజనైజ్డ్ పాల పొడిని తూచి, అసిటోనైట్రిల్:నీరు (50:50, v/v; 5 mL)తో కలిపారు. ఈ మిశ్రమాన్ని 1 నిమిషం పాటు కలిపి, ఆపై అల్ట్రాసోనిక్ బాత్‌లో 30 నిమిషాల పాటు సోనికేట్ చేసి, చివరగా 1 నిమిషం పాటు షేక్ చేశారు. అనంతరం, ఈ మిశ్రమాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 10 నిమిషాల పాటు 9000 × g వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, 0.45 μm సిరంజి ఫిల్టర్‌ను ఉపయోగించి సూపర్నాటెంట్‌ను 2 ml ఆటోశాంప్లర్ వయల్‌లోకి ఫిల్టర్ చేశారు. తరువాత వడపోత ద్రవాన్ని (250 μl) నీటితో (750 μl) కలిపి HPLC వ్యవస్థ10,42 పైకి ఎక్కించారు.
పద్ధతిని ధ్రువీకరించడానికి, మేము సరైన పరిస్థితులలో రికవరీ, ఖచ్చితత్వం, గుర్తింపు పరిమితి (LOD), పరిమాణీకరణ పరిమితి (LOQ) మరియు సూక్ష్మతను నిర్ధారించాము. బేస్‌లైన్ నాయిస్ స్థాయికి మూడు రెట్లు పీక్ ఎత్తు ఉన్న నమూనా కంటెంట్‌ను LODగా నిర్వచించాము. మరోవైపు, సిగ్నల్-టు-నాయిస్ నిష్పత్తికి 10 రెట్లు పీక్ ఎత్తు ఉన్న నమూనా కంటెంట్‌ను LOQగా నిర్వచించాము.
ఏడు డేటా పాయింట్లతో కూడిన క్రమాంకన వక్రరేఖను ఉపయోగించి పరికర ప్రతిస్పందనను నిర్ధారించారు. వివిధ మెలమైన్ పరిమాణాలను (0, 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1 మరియు 1.2) ఉపయోగించారు. మెలమైన్ గణన ప్రక్రియ యొక్క సరళతను నిర్ధారించారు. అదనంగా, ఖాళీ నమూనాలకు అనేక విభిన్న స్థాయిలలో మెలమైన్‌ను జోడించారు. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పాలపొడి నమూనాలలోకి 0.1–1.2 μg mL−1 ప్రామాణిక మెలమైన్ ద్రావణాన్ని నిరంతరం ఇంజెక్ట్ చేయడం ద్వారా క్రమాంకన వక్రరేఖను నిర్మించారు మరియు దాని R2 = 0.9925. ప్రక్రియ యొక్క పునరావృతత మరియు పునరుత్పత్తి ద్వారా కచ్చితత్వాన్ని అంచనా వేశారు మరియు మొదటి మరియు తదుపరి మూడు రోజులలో (మూడుసార్లు) నమూనాలను ఇంజెక్ట్ చేయడం ద్వారా దీనిని సాధించారు. జోడించిన మెలమైన్ యొక్క మూడు విభిన్న గాఢతల కోసం RSD %ను లెక్కించడం ద్వారా పద్ధతి యొక్క పునరావృతతను అంచనా వేశారు. ఖచ్చితత్వాన్ని నిర్ధారించడానికి రికవరీ అధ్యయనాలు నిర్వహించారు. శిశువుల ఫార్ములా మరియు పొడి పాల నమూనాలలో మెలమైన్ గాఢత యొక్క మూడు స్థాయిలలో (0.1, 1.2, 2) వెలికితీత పద్ధతి ద్వారా రికవరీ స్థాయిని లెక్కించారు9,11,15.
అంచనా వేయబడిన రోజువారీ ఆహార తీసుకోవడం (EDI) కింది సూత్రాన్ని ఉపయోగించి నిర్ణయించబడింది: EDI = Ci × Cc/BW.
ఇక్కడ Ci అనేది సగటు మెలమైన్ కంటెంట్, Cc అనేది పాల వినియోగం మరియు BW అనేది పిల్లల సగటు బరువు.
SPSS 24 ఉపయోగించి డేటా విశ్లేషణ జరిగింది. కొల్మోగోరోవ్-స్మిర్నోవ్ పరీక్షను ఉపయోగించి సాధారణతను పరీక్షించారు; మొత్తం డేటా నాన్‌పారామెట్రిక్ పరీక్షలు (p = 0). అందువల్ల, సమూహాల మధ్య గణనీయమైన తేడాలను గుర్తించడానికి క్రుస్కల్-వాలిస్ పరీక్ష మరియు మాన్-విట్నీ పరీక్షను ఉపయోగించారు.
ఇంగెల్ఫింగర్, జూనియర్. మెలమైన్ మరియు ప్రపంచ ఆహార కాలుష్యంపై దాని ప్రభావం. న్యూ ఇంగ్లాండ్ జర్నల్ ఆఫ్ మెడిసిన్ 359(26), 2745–2748 (2008).
లించ్, RA, మరియు ఇతరులు. పిల్లల గిన్నెలలో మెలమైన్ వలసపై pH ప్రభావం. ఇంటర్నేషనల్ జర్నల్ ఆఫ్ ఫుడ్ కంటామినేషన్, 2, 1–8 (2015).
బారెట్, MP మరియు గిల్బర్ట్, IH ట్రైపనోజోముల లోపలికి విషపూరిత సమ్మేళనాలను లక్ష్యంగా చేసుకోవడం. ప్రోగ్రెస్ ఇన్ పారాసైటాలజీ 63, 125–183 (2006).
నిర్మాన్, MF, మరియు ఇతరులు. ఔషధ పంపిణీ వాహనాలుగా మెలమైన్ డెండ్రిమర్‌ల ఇన్ విట్రో మరియు ఇన్ వివో మూల్యాంకనం. ఇంటర్నేషనల్ జర్నల్ ఆఫ్ ఫార్మసీ, 281(1–2), 129–132(2004).
ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ. మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లం యొక్క విష శాస్త్ర అంశాలను సమీక్షించడానికి నిపుణుల సమావేశాలు 1–4 (2008).
హోవ్, AK-C., క్వాన్, TH మరియు లీ, PK-T. మెలమైన్ విషప్రభావం మరియు మూత్రపిండం. జర్నల్ ఆఫ్ ది అమెరికన్ సొసైటీ ఆఫ్ నెఫ్రాలజీ 20(2), 245–250 (2009).
ఓజ్తుర్క్, ఎస్. మరియు డెమిర్, ఎన్. హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) ద్వారా పాల ఉత్పత్తులలో మెలమైన్ గుర్తింపు కోసం ఒక నూతన IMAC అధిశోషకం అభివృద్ధి. జర్నల్ ఆఫ్ ఫుడ్ సింథసిస్ అండ్ అనాలిసిస్ 100, 103931 (2021).
చాన్సువర్న్, వి., పానిక్, ఎస్. మరియు ఇమిమ్, ఎ. మన్నిచ్ గ్రీన్ రియాక్షన్ ఆధారంగా ద్రవ పాలలో మెలమైన్ యొక్క సరళమైన స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్ నిర్ధారణ. స్పెక్ట్రోకెమ్. ఆక్టా పార్ట్ ఎ మోల్. బయోమోల్. స్పెక్ట్రోస్క్. 113, 154–158 (2013).
డియాబ్స్, ఎం. మరియు ఎల్-హబీబ్, ఆర్. HPLC/డయోడ్ అర్రే క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా శిశువుల ఫార్ములా, పాలపొడి మరియు పాంగాసియస్ నమూనాలలో మెలమైన్ నిర్ధారణ. జర్నల్ ఆఫ్ ఎన్విరాన్‌మెంటల్ అనలిటికల్ టాక్సికాలజీ, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
స్కిన్నర్, KG, థామస్, JD, మరియు ఓస్టర్లో, JD మెలమైన్ విషప్రభావం. జర్నల్ ఆఫ్ మెడికల్ టాక్సికాలజీ, 6, 50–55 (2010).
ప్రపంచ ఆరోగ్య సంస్థ (WHO), మెలమైన్ మరియు సైనూరిక్ ఆమ్లం యొక్క విష శాస్త్రం మరియు ఆరోగ్య అంశాలు: హెల్త్ కెనడా మద్దతుతో WHO/FAO సహకార నిపుణుల సమావేశ నివేదిక, ఒట్టావా, కెనడా, 1-4 డిసెంబర్ 2008 (2009).
కోర్మా, SA, మరియు ఇతరులు. నూతన క్రియాత్మక నిర్మాణ లిపిడ్లను కలిగి ఉన్న శిశు ఫార్ములా పౌడర్ మరియు వాణిజ్య శిశు ఫార్ములా యొక్క లిపిడ్ కూర్పు మరియు నాణ్యతపై తులనాత్మక అధ్యయనం. యూరోపియన్ ఫుడ్ రీసెర్చ్ అండ్ టెక్నాలజీ 246, 2569–2586 (2020).
ఎల్-వసీఫ్, ఎం. మరియు హషెమ్, హెచ్. పామాయిల్ ఉపయోగించి శిశువుల ఫార్ములా యొక్క పోషక విలువ, నాణ్యత లక్షణాలు మరియు నిల్వ కాలాన్ని మెరుగుపరచడం. మిడిల్ ఈస్ట్ జర్నల్ ఆఫ్ అగ్రికల్చరల్ రీసెర్చ్ 6, 274–281 (2017).
యిన్, W., మరియు ఇతరులు. ముడి పాలు, పొడి పాలు మరియు జంతువుల మేతలో మెలమైన్‌ను గుర్తించడానికి మెలమైన్‌కు వ్యతిరేకంగా మోనోక్లోనల్ యాంటీబాడీల ఉత్పత్తి మరియు పరోక్ష పోటీ ELISA పద్ధతి అభివృద్ధి. జర్నల్ ఆఫ్ అగ్రికల్చరల్ అండ్ ఫుడ్ కెమిస్ట్రీ 58(14), 8152–8157 (2010).